Мы описываем процедуры подготовки и электрофизиологические записи с срезах мозга, которые поддерживают спинно-вентральной оси медиальное энторинальной коры (MEC). Поскольку нейронная кодирования место следующим спинно-вентрально организации в MEC, эти процедуры облегчить исследование клеточных механизмов, важных для навигации и память.
Вычисления в мозг опирается на нейроны, отвечающие соответствующим образом их синаптические входы. Нейроны различаются по своим дополнением и распределения мембранных ионных каналов, которые определяют, как они реагируют на синаптические входы. Тем не менее, связь между этими свойств клеток и функции нейронов в себя животным не очень хорошо понял. Один из подходов к этой проблеме является изучение топографически организованные нейронных цепей, в которых положение отдельных нейронов карты на информацию, которую они кодируют или расчеты они проводят 1. Эксперименты с использованием этого подхода предлагают принципы настройки синаптических ответов, лежащих в основе кодирования информации в сенсорных и когнитивных схем 2,3.
Топографической организации пространственных представлений вдоль спинной-вентральной оси медиальное энторинальной коры (MEC) дает возможность устанавливать отношения между клеточных механизмов и расчетов яmportant пространственного познания. Нейроны в слое II от грызунов MEC кодирования местоположения с помощью сетки, как стрельба поля 4-6. Для нейронов спинного найти на позиции в MEC расстояние между отдельными полями стрельбы, которые образуют сеть составляет порядка 30 см, тогда как для нейронов в вентральной все более и более позиций это расстояние увеличивается до более чем 1 метр. Несколько исследований показали, свойств клеток нейронов в слое II из MEC, что, как расстояние между сеткой стрельбы поля, также различаются в зависимости от их спины-вентральной позиции, полагая, что эти сотовые свойства важны для вычисления пространственных 2,7-10.
Здесь мы опишем процедуры подготовки и электрофизиологические записи с срезах мозга, которые поддерживают спинно-вентрально степени MEC позволяет исследование топографической организации биофизических и анатомические свойства MEC нейронов. Спинно-вентральной позиции выявленных п.eurons относительно анатомических ориентиров трудно установить точно с протоколами, которые используют горизонтальные кусочки MEC 7,8,11,12, как это трудно установить ориентиры для точного спинно-вентрально место среза. Процедуры описываются позволяют точного и последовательного измерения расположения записал клеток вдоль спинной-вентральной оси MEC, а также визуализации молекулярных градиентов 2,10. Процедуры были разработаны для использования с взрослой мыши (> 28 дней) и успешно работает на мышах до 1,5 лет. С коррективы они могут быть использованы с младшими мышей или других видов грызунов. Стандартизированной системы подготовки и оценки будет способствовать систематическое исследование клеточного и микросхемы свойства этой области.
Для облегчения исследования MEC схемы свойства, которые следуют спинно-вентрально организации были описаны здесь подробно процедуру для получения парасагиттальных подготовки кусочек, который сохраняет спинно-вентрально степени MEC.
Критические шаги
У…
The authors have nothing to disclose.
Мы благодарность за их поддержку: Комиссия по стипендиям Содружества Великобритании финансирования (HP), EPSRC (HP), СИББН (РНБ) и Европейского Союза Марии Кюри (РНБ).
Cutting ACSF(mM) | Standard ACSF(mM) | Internal solution (mM) | CASNumber | Supplier Catalogue Number | |
NaCl | 86 | 124 | 7647-14-5 | Sigma S9888 | |
NaH2PO4 | 1.2 | 1.2 | 13472-35-0 | Sigma 71505 | |
KCl | 2.5 | 2.5 | 10 | 7447-40-7 | Sigma P3911 |
NaHCO3 | 25 | 25 | 144-55-8 | Fischer S/4240 | |
Glucose | 25 | 20 | 50-99-7 | Sigma G5767 | |
Sucrose | 75 | 57-50-1 | Sigma S5016 | ||
CaCl2 | 0.5 | 2 | 10043-52-4 | VWR 190464K | |
MgCl2 | 7 | 1 | 2 | 7786-30-3 | Sigma 63020 |
K Gluconate | 130 | 299-27-4 | Sigma G4500 | ||
HEPES | 10 | 7365-45-9 | Sigma H3375 | ||
EGTA | 0.1 | 67-42-5 | Sigma E4378 | ||
Na2ATP | 2 | 34369-07-8 | Sigma A7699 | ||
Na2GTP | 0.3 | 36051-31-7 | Sigma G8877 | ||
NaPhospho-Creatine | 10 | 19333-65-4 | Sigma P7936 | ||
Biocytin (optional) | 2.7 | 576-19-2 | Sigma B4261 |
Table 1. Cutting ACSF, standard ACSF and K-Gluconate internal solution recipes.