Прижизненные микроскопия микроциркуляции мозга мыши, используя Закрытая черепно Window
Summary
Прижизненные микроскопии следовать временным и пространственным гемодинамики и воспалительных явлений в пиальных микроциркуляцию.
Abstract
Это экспериментальная модель была разработана для оценки мыши пиальных микроциркуляции при остром и хроническом, физиологических и патофизиологических гемодинамики, воспалительных и метаболических условиях, используя в естественных условиях флуоресцентной микроскопии. Закрытой черепно окно находится над левой теменно-затылочной коры мышей. Местные микроциркуляцию записывается в реальном времени через окно с помощью эпи и флуоресцентной подсветкой, и измерения диаметров судов и красных кровяных телец (эритроцитов) скоростей выполняются. РБК скорость измеряется в режиме реального времени кросс-корреляции и / или флуоресцентными меченых эритроцитов. Лейкоцитов и тромбоцитов приверженность мягкой мозговой оболочки сосудов и оценки перфузии и сосудистой утечки сделаны с помощью флуоресценции меченых маркеров, таких как альбумин-FITC и анти-CD45-TxR антител. Микроциркуляции может быть повторно видеокассету в течение нескольких дней. Мы использовали в первый раз закрыть окно мозга прижизненной микроскопии для исследования микроциркуляции пиальных следовать динамические изменения в ходе Plasmodium инфекции berghei ANKA у мышей, и показать, что выражение CM связано с нарушениями микроциркуляции характеризуется сужением сосудов, глубокое снижение артериального потоков и в конечном итоге сосудистого коллапса.
Protocol
Discussion
Прижизненной микроскопии описаны здесь представляет собой уникальный и мощный инструмент для детального наблюдения пиальных микроциркуляцию в мышь. Это позволяет выделение отдельных артериол и венул и измерения изменений ряда параметров, таких как диаметре сосудов, РБК скорости, по…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была поддержана грантами R01-HL87290, R01-HL87290-S1 и R01-AI082610 из Национального института здоровья в LJMC.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Isoflurane | Baxter | FDG9623 | ||
| Carbocyanine dye Dil | Molecular Probes | D306 | ||
| Albumin-FITC | Sigma-Aldrich | A9771 | ||
| Anti-CD45-TxR Ab | Invitrogen | MCD4517 | ||
| P. berghei ANKA-GFP | MR4 | MRA-865 |
Referencias
- Mostany, R., Portera-Cailliau, C. A craniotomy surgery procedure for chronic brain imaging. J. Vis. Exp. (15), (2008).
- Intaglietta, M., Tompkins, W. R. Microvascular measurements by video image shearing and splitting. Microvasc. Res. 5, 309-312 (1973).
- Briceno, J. C., Cabrales, P., Tsai, A. G., Intaglietta, M. Radial displacement of red blood cells during hemodilution and the effect on arteriolar oxygen profile. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 286, 1223-1228 (2004).
- Bishop, J. J., Nance, P. R., Popel, A. S., Intaglietta, M., Johnson, P. C. Relationship between erythrocyte aggregate size and flow rate in skeletal muscle venules. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 286, H113-120 (2004).
- Baldwin, A. L. Modified hemoglobins produce venular interendothelial gaps and albumin leakage in the rat mesentery. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 277, H650-H659 (1999).
- Cabrales, P., Zanini, G. M., Meays, D., Frangos, J. A., Carvalho, L. J. Murine cerebral malaria is associated with a vasospasm-like microcirculatory dysfunction, and survival upon rescue treatment is markedly increased by nimodipine. Am. J. Pathol. 176 (3), 1306-1315 (2010).
