在全安装的胚胎神经系统的可视化果蝇胚胎
Summary
我们描述了程序准备上演<em>果蝇</em>胚胎神经系统的胚胎发育过程中的可视化的胚胎。
Abstract
果蝇的胚胎是有吸引力的模型系统，为研究神经元发育的细胞和分子基础。在这里，我们描述了果蝇胚胎神经系统使用神经元蛋白的抗体的可视化的过程。由于整个胚胎周围神经和中枢神经系统，在单个细胞水平（Dambly – Chaudière等，1986;。博德默等，1987;。博德默等 ，1989），这些系统的像差以及特点可以很容易地确定使用不同的神经元蛋白的抗体。胚胎发育是在特定的时间收集，以确保在适当的可视化的发展阶段的胚胎。集合后，胚胎的外层，蛋壳膜和周围胚胎的卵黄信封，被删除前固定。胚胎，然后与神经细胞抗体培养和可视化使用荧光标记的抗体。在阶段的胚胎12-17可视化访问胚胎的神经系统。阶段12的中枢神经系统生殖乐队开始阶段15的缩短和明确的格局已经实现的合缝。通过阶段17中枢神经系统的合同和PNS的全面发展（坎波斯，奥尔特加等人1985年）。因此，在PNS和CNS格局的变化可以很容易地观察到在这些发育阶段。
Protocol
1。试剂的制备准备PEMFA缓冲区，使用100mm的管道，2mm的EGTA，1毫米硫酸镁 4 。缓冲区的pH值调整至7.0。 PEMFA缓冲过滤消毒和储存在4 ° C PBT的加入为1ml准备TRITON X – 100至100ml 1X PBS（磷酸盐缓冲液）（pH值7.0）。保存在4 ° C。 准备1X PBS（pH值7.0）0.01％NaAcide的5％BSA（牛血清白蛋白）。 准备的盐溶液，用0.7％NaCl和去离子水0.03％的Triton X – 100。 准备结合PEMFA?…
Discussion
果蝇胚胎是一个功能强大的系统，为在神经元发育的调查细胞和分子的变化。在这个协议中，我们已经演示了如何准备整装胚胎进行免疫组化。卡罗尔和斯科特，1985年的协议，我们已经适应了这个协议。该协议还可以适应测试其他神经元抗体，但抗体的优化应该做。此外，胚胎PNS和中枢神经系统的发育缺陷，可以很容易地通过比较不同的突变品系的胚胎可视化。我们已经成功地使用这一?…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SG是从美国纽约州立大学布法罗分校和约翰R. Oishei基金会的资金支持。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 37% formaldehyde | Fisher | BP531-25 | ||
| CSP | Developmental Studies Hybridoma Bank | |||
| HRP-FITC | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 323-095-021 | ||
| Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG | Invitrogen | A-11004 | ||
| Vectashield Mounting Medium | Vector Laboratories, Inc. | H-1000 |
Referencias
- Bodmer, R., Barbel, S., Sheperd, S., Jack, J. W., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Transformation of sensory organs by mutations of the cut locus of D. melanogaster. Cell. 51, 293-307 (1987).
- Bodmer, R., Carretto, R., Jan, Y. N. Neurogenesis of the peripheral nervous system in Drosophila embryos: DNA replication patterns and cell lineages. Neuron. 3, 21-32 (1989).
- Campos-Ortega, J. A., Hartenstein, V. . The Embryonic Development of Drosophila melanogaster. , (1985).
- Carroll, S. B., Scott, M. P. Localization of the fushi tarazu protein during Drosophila embryogenesis. Cell. 43, 47-57 (1985).
- Dambly-Chaudière, C., Ghysen, A., Jan, Y. N., Jan, L. Y. Muscle connections between imaginal discs in Drosophila. Biología del desarrollo. 113, 288-294 (1986).
Tags
VisualizationEmbryonic Nervous SystemWhole-mount Drosophila EmbryosCellular DevelopmentMolecular BasisNeuronal DevelopmentAntibodiesPeripheral Nervous SystemCentral Nervous SystemAberrationsNeuronal ProteinsDevelopmental StagesFixationFluorescently Labeled Secondary AntibodiesCNS Germ BandCommissure PatternPNS Development
Citar este artículo
Kaczynski, T. J., Gunawardena, S. Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos. J. Vis. Exp. (46), e2150, doi:10.3791/2150 (2010).