Summary

Non invasiva di imaging di homing dei leucociti e la migrazione In vivo</em

Published: December 05, 2010
doi:

Summary

Qui, descriviamo un non-invasiva a due fotoni (2P) approccio microscopia per lo studio dei leucociti homing nella zampa del mouse. Discutiamo gli aspetti tecnici della nostra preparazione dei tessuti di imaging e camminare il lettore attraverso un tipico esperimento di configurazione iniziale di esecuzione e di raccolta dei dati.

Abstract

A due fotoni (2P) microscopia è una tecnica di imaging ad alta risoluzione che è stata ampiamente adattato dai biologi. Il valore di microscopia 2P è che fornisce ricche informazioni spazio-temporali per quanto riguarda i comportamenti delle cellule all'interno dei tessuti intatti e in topi vivi. Reclutamento dei leucociti svolgono un ruolo importante nella difesa dell'ospite contro le infezioni e quando incontrollato, può contribuire a malattie infiammatorie e autoimmuni. Studiare il reclutamento dei leucociti in vivo è tecnicamente impegnativo poiché le cellule si spostano rapidamente all'interno dei vasi situato in profondità all'interno dei tessuti dispersione della luce. Fino ad oggi, gli studi di imaging più intravitale richiedono una preparazione chirurgica per esporre i vasi sanguigni e dei tessuti. Per evitare il danno ai tessuti e l'infiammazione indotta da un intervento chirurgico se stessa, qui, si descrive un non-invasiva a cella singola approccio di imaging che può essere utilizzato per studiare il traffico dei leucociti nella zampa del mouse e falangi. Discutiamo gli aspetti tecnici della nostra preparazione 2P imaging e camminare il lettore attraverso un tipico esperimento di configurazione iniziale di esecuzione e di raccolta dei dati.

Protocol

1. Animal preparazione: Questo protocollo utilizza adulto femmina adulta LysM-eGFP topi, nei quali neutrofili e macrofagi sono fluorescente mediante l'espressione di eGFP 1. L'etichettatura dei vasi sanguigni: Per visualizzare i vasi sanguigni, 15μl di non mirato quantum dots (655nm) sono diluiti in 100 ml di PBS e iniettato per via endovenosa nel topo 10-30 minuti prima di imaging. Anestesia: Posizionare il mouse nella …

Discussion

In questo protocollo video dimostriamo le modalità di imaging non invasiva 2P di reclutamento dei leucociti in risposta all'infiammazione.

La zampa è un sito classico fisiologici per lo studio dell'infiammazione come la malattia di allergie, infezioni e autoimmuni 4-7. 2P di imaging fornisce un quadro dettagliato delle fasi distinte nei percorsi traffico dei leucociti, dal rotolamento e adesione nei vasi sanguigni di chemiotassi ai siti delle funzioni effettrici. Abbiamo…

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Questo lavoro è stato sostenuto da NIH concedere R01-3155-53502 e Washington University-Pfizer accordo Ricerca Biomedica.

Materials

Material Name Tipo Company Catalogue Number Comment
Isoflurane, USP   Butler Animal Health Supply 029405  
655nm non-targeted quantum dots   Invitrogen Q21021MP  
Tetramathylrhodamine conjugated
E. coli BioParticles
  Invitrogen E2862  
Listeria monocytogenes (Lm)   Reference 2    
Quick gel   Duro    
Puralube Vet Ointment   Pharmaderm Animal Health    
Insulin syringes   BD 08290-3284-38  
PBS   Thermo Scirntific SH30256.02  

Referencias

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Wang, B., Zinselmeyer, B. H., McDole, J. R., Gieselman, P. A., Miller, M. J. Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo. J. Vis. Exp. (46), e2062, doi:10.3791/2062 (2010).

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