בחומר וידאו משלים זה, אנו מראים פרוטוקול עבור כרונית<em> In vivo</em> הדמיה של המוח שלם באמצעות הכנה דליל-הגולגולת.
Abstract
בשנת vivo הדמיה באמצעות שני פוטונים לייזר מיקרוסקופיית (2PLSM) מאפשר לימוד של תאים חיים תהליכים עצביים במוח שלם. הטכניקה המוצגת כאן מאפשרת הדמיה של אותו אזור של המוח במספר נקודות זמן (הדמיה כרונית) עם רזולוציה מיקרוסקופי המאפשר מעקב של הקוצים הדנדריטים שהם מבנים קטנים המייצגים את רוב אתרי מעוררים postsynaptic במערכת העצבים המרכזית. היכולת בבירור לפתור מבנים קורטיקליים קנס על מספר נקודות זמן יש יתרונות רבים, במיוחד במחקר של פלסטיות המוח שבו שינויים מורפולוגיים על הסינפסות שיפוץ מעגל עשוי לעזור להסביר את המנגנונים. בחומר וידאו משלימים זה, אנו מראים פרוטוקול עבור כרונית in vivo הדמיה של המוח שלם באמצעות הכנה דליל-הגולגולת. ההכנה סחוט הגולגולת היא גישה פולשנית, אשר ימנע נזק אפשרי ואת הדורה / או קליפת המוח, ובכך להקטין את תחילתה של תגובה דלקתית. כאשר בפרוטוקול זה מבוצע כהלכה, אפשר בבירור לעקוב אחר השינויים המאפיינים עמוד השדרה הדנדריטים במוח שלם על פני תקופה ממושכת.
Protocol
כדי להמחיש את הנוירונים במוח שלם באמצעות שני פוטונים מיקרוסקופיה, הכנה שבו הנוירונים מסומנים עם סמנים ניאון משמש. בניסויים שהוצגו כאן אנו משתמשים בקו ה-GFP-M עכבר מהונדס אשר תוויות שכבה 5 תאים פירמידליים 1. 5 שכבת תאים פירמידליים פרויקט תהליכים דנדריט…
Discussion
הדמיה כרונית באמצעות שני פוטונים מיקרוסקופיה הופכת פופולרית יותר ויותר טכניקה ללמוד שינויים מורפולוגיים מופעלות במהלך 2-5 הפלסטיות. כאן אנו מדגימים הכנה דליל, גולגולת לעקוב הקוצים הדנדריטים מזוהה במוח העכבר על ימים שלמים הדמיה שונים. בפרוטוקול זה, הגולגולת נו?…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי פרס Wellcome קריירה בורוז במדעי ביו (AKM), קרן וייטהול מענק מחקר (AKM), מלגת קרן סלואן (AKM), NIH EY019277 (AKM), וכן במימון ניי, חזון הדרכה גרנט, EY013319 ( EAK).
Materials
Material Name
Tipo
Company
Catalogue Number
Comment
Fentanyl Citrate
In-house pharmacy
Fentanyl Cocktail: Anesthesic Cocktail;
IP Dose: 0.0125 ml/g
Final cocktail conc.: 0.05 mg/kg
Medetomindine Hydrochloride
In-house pharmacy
Fentanyl Cocktail: Anesthesic Cocktail;
IP Dose: 0.0125 ml/g
Final cocktail conc.: 0.05 mg/kg
Midazolam HCL
In-house pharmacy
Fentanyl Cocktail: Anesthesic Cocktail;
IP Dose: 0.0125 ml/g
Final cocktail conc.: 0.05 mg/kg
2,2,2-tribromoethanol
Avertin Cocktail: Anesthetic;
IP Dose: 0.0075 cc/ g
Final cocktail conc.: 1%
2-methyl-2-butanol (Final concentration: 0.775%)
Avertin Cocktail: Anesthetic;
IP Dose: 0.0075 cc/ g
Final cocktail conc.: .775%
TC-1000 Temp. Control System for Mice
CWE, Inc.
TC-1000 Mouse
Body Temp. Regulation
Toberadex
In-house pharmacy
Eye Ointment
10% Ferric Chloride
Ricca Chemical, Inc.
3120-32
Thin-skull preparation
Microsurgical Blade
Sable Industries
S-6400
Thin-skull preparation
Cyanoacrylate 404,401
Loctite
P/N 46551
Thin-skull preparation
Cyanoacrylate 401
Loctite
P/N 40140
Thin-skull preparation
Zip Kicker Glue Accelerator
Pacer Technology
PT-29
Thin-skull preparation
Micro Drill Steel Burrs 0.7mm tip diameter
Fine Science Tools
19008-07
Thin-skull preparation
Microtorque Control Box and Tech2000 Handpiece
Ram Products, Inc.
TECH2000ON/OFF
Thin-skull preparation
#6-0 (0.7 metric ) silk suture
Ethicon
K8894H
Taper C-1
Eye Dressing Forceps, 10cm, tip width 0.5mm, curved
Surgical Tools
Fine Science Tools
11152-10
Extra Fine Bonn Scissors, 8.5cm, straight tip, cutting edge 13mm
Surgical Tools
Fine Science Tools
14084-08
Standard Pattern Forceps, straight, 2.5mmx1.35mmtip, 12cm
Kelly, E. A., Majewska, A. K. Chronic Imaging of Mouse Visual Cortex Using a Thinned-skull Preparation. J. Vis. Exp. (44), e2060, doi:10.3791/2060 (2010).