Staartaderinjectie: een methode om kankercellen toe te dienen voor gemetastaseerde studies in een muismodel

1. Staartaderinjectie van gelabelde kankercellen

OPMERKING: Stap 1.2.4 is geoptimaliseerd voor 4T1 cellen die groeien in syngeneïsche BALB/c muizen. Als andere kankercellijnen en muizenstammen worden gebruikt, moeten eerst het aantal geïnjecteerde cellen en de lengte van de test worden geoptimaliseerd.

1. Breid de 4T1-cellijnen gegenereerd in stap 2 uit op twee gerechten van 15 cm in complete groeimedia, zodat overtollige cellen beschikbaar zijn op de dag van injectie.
2. Bereid de cellen als volgt voor op staartaderinjectie:
   1. Aspireer de media en spoel de celplaten af met 1x PBS.
   2. Trypsinize de cellen met 5 ml trypsine per 15 cm plaat gedurende 2-5 minuten (cellen moeten vrij afspoelen van de bodem van de put). Breng alle cellen over in een conische buis. Was de resterende cellen uit de weefselkweekschaal met voldoende volledige groeimedia om de trypsine te doven en voeg de was toe aan dezelfde conische buis.
   3. Tel de cellen met behulp van een geautomatiseerde celteller om het totale celnummer te bepalen.
   4. Centrifugeer de cellen gedurende 3 minuten op 122 x g, aspireer het supernatant en resuspendeer de cellen in 1x PBS in de gewenste concentratie. Hier worden 2,5 x 10⁴ cellen in elke muis geïnjecteerd in 100 μL PBS, dus de geresuspendeerde cellen bij 2,5 x 10⁵ cellen/ml. Houd de celsuspensingen op ijs tot injectie.
      OPMERKING: het is belangrijk om de tijd tussen trypsinisatie van de cellen en de staartaderinjectie te beperken tot ongeveer 1 uur.
3. Injecteer 4T1 cellen vanaf stap 1.2.5 in muizen via de laterale staartader als volgt:
   1. Werk in een kap in de dierenkliniek en meng de cellen voorzichtig maar grondig door de buis om te keren of een spuit van 1 ml te gebruiken om ervoor te zorgen dat ze gelijkmatig worden geresuspendeerd. Zorg er altijd voor dat de cellen worden geresuspendeerd voordat u de spuit laadt.
   2. Laad een Luer-lock spuit van 1 ml met celsuspensie en verdrijf overtollige luchtbellen. Plaats een 1/2 inch, 30-gauge naald op de spuit met de schuine kant omhoog en verdrijf luchtbellen.
   3. Plaats de muis voorzichtig in een knaagdierbeperk.
   4. De laterale staartaders moeten zichtbaar en verwijd zijn. Zo niet, knijp dan voorzichtig in de basis van de staart en dompel de staart in warm kraanwater om de aderen te verwijden.
      OPMERKING: Verwijding van de aderen kan ook worden bereikt door de muizenkooi onder een verwarmingslamp en/of bovenop een verwarmingskussen te plaatsen.
   5. Gebruik een alcoholdoekje om de staart schoon te maken. Steek de naald in de staartader, schuine kant naar boven en injecteer 100 μL celsuspensie.
      OPMERKING: Als de naald goed in de ader wordt gestoken, moet deze gemakkelijk iets naar voren en naar achteren glijden en mag er geen weerstand zijn wanneer de zuiger wordt geduwd. Succesvolle injecties moeten ook resulteren in een "flush" waarbij de blauwe kleur van de ader na de injectie enkele seconden wit wordt.
4. Verwijder langzaam de naald en gebruik een steriel gaasje, oefen druk uit op de injectieplaats om bloedingen te stoppen.
5. Breng de muis terug naar de kooi en houd deze 15 minuten in de gaten om volledig herstel te garanderen. Muizen moeten 3x per week worden gecontroleerd op tekenen van pijn of angst.
6. Bewaak muizen gedurende 3-6 weken op uitzaaiingen en groei (afhankelijk van cellijn en muisstam) met behulp van een in vivo beeldvormingsapparaat voor levende dieren (zie stap 1.5 en 1.6).