Het meten van de buigstijfheid van de bacteriële cellen Met behulp van een optische val

Grow E. coli cellen in Luria-Beltrani bouillon (LB) medium exponentiële fase (OD = 0.2-0.4). Groei van de cultuur in LB aangevuld met 50 ug / ml van cefalexine gedurende 15 min tot filamenteuze groei te induceren, en dan concentreren van de cultuur door 5 keer door centrifugeren. Maak PEI-gecoate dekglaasje door stromend 1% polyethyleenimine verdund in water in een flow-kamer, en wassen met water na een 5-minuten incubatie. Stromen de geconcentreerde celcultuur in de kamer, en gewassen met een mengsel van LB en cefalexine (50μg/mL) na 3 min tot losse cellen te verwijderen. Incubeer de kamer bij 37 ° C gedurende 30 min-1 uur te laten de bijgevoegde cellen groeien voor plaatsing op de optische trapping instrument. Maak polylysine-gecoate kralen door incuberen van 0,5 micrometer diameter van polystyreen parels (Bangs Labs) in 0,1% polylysine verdund in water gedurende 30 minuten. Was daarna de kralen 3 keer en resuspendeer in water. Verdun de kraal-oplossing met een factor twee in LB met cefalexine (50μg/mL) en voeg deze toe in de stroom kamer. Optisch val een drijvende kraal en raak het aan de vrije uiteinde van een cel. (We maken gebruik van een Mad Labs stad piëzo stadium om de controle over de beweging van het monster.) Wanneer een geschikte kraal / cel combinatie is gevonden, was de kamer met cefalexine in LB (50μg/mL) om losse kralen te verwijderen. Run op maat geschreven LabView programma om buigkrachten van toepassing op cel-en opnemen van kracht-verplaatsing data. Programma Details Kalibreer detector reactie van raster het scannen van de bijgevoegde kraal binnen de detectie laserstraal en het opnemen van 3D-PSD spanningssignalen. Identificeer cel lange as in de microscoop beeld. Bewegen cel in stappen in een richting loodrecht op de cel lange as. Noteer de afstand verplaatst en de verplaatsing van de optische val. Om te zetten verplaatsing naar toegepaste kracht met behulp van de eerder gemeten val stijfheid en op te slaan tip verplaatsing en kracht om bestand. Geheimen van het succes: In stap 8), moet men op zoek naar een cel met een goed gedefinieerde vast te beëindigen. Sommige cellen zijn gewoon vast op een tip, en het buigen kracht zijn op het andere tip leidt tot een whole-cell draaien in plaats van buigen. Een geschikte paar wordt gevonden door het buigen van elke cel snel met de hand behulp van de joystick-gecontroleerde fase beweging. Representatieve resultaten: Figuur 1. Deze figuur toont kracht-verplaatsing data voor een enkele cel. De helling van deze lijn is de buigstijfheid van de cel.