Detección de modificaciones genómicas: un método para identificar mutantes generados por CRISPR en Drosophila
Published: April 30, 2023
Abstract
Fuente: Du, L., et al. Una estrategia eficiente para generar sistemas de transcripción binaria específicos del tejido en Drosophila mediante la edición del genoma. J. Vis. (2018).
Este video describe un método de cribado para identificar moscas Drosophila transgénicas, cuyo genoma fue modificado usando CRISPR-Cas9. CRISPR-Cas9 es una poderosa herramienta de edición del genoma que revolucionó la forma en que los científicos pueden manipular el genoma de un organismo. En el protocolo de ejemplo, veremos cómo identificar mutantes generados por CRISPR, en los que una inserción de una secuencia de transactivación reemplaza al primer exón del gen sin ramas (bnl),creando así una línea conductora específica del gen bnl, bnl-LexA.
Protocol
Este protocolo es un extracto de Du et al., An Efficient Strategy for Generating Tissue-specific Binary Transcription Systems in Drosophila by Genome Editing, J. Vis. Exp. (2018). 1. Genética de mosca y cribado (Figura 1 y Figura 2) Cuando los embriones inyectados se convierten en adultos, cruza cada una de las moscas G0 a las moscas balanceadoras. Seleccione el equilibrador adecuado para el cromosoma que contiene el alelo objetivo. An…
Representative Results
Figura 1: Una visión general del flujo de trabajo para la edición del genoma mediada por CRISPR/Cas9 para generar un sistema de transcripción binaria. Se indica la duración aproximada de tiempo necesaria para cada paso. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura. <img alt="Figu…
Materials
| Tris-HCl | Sigma Aldrich | T3253 | Biología molecular |
| EDTA | Sigma Aldrich | E1161 | Biología molecular |
| NaCl | Sigma Aldrich | S7653 | Biología molecular |
| UltraPure DNase/RNase-Free Water | ThermoFisher Scientific | 10977-023 | Biología molecular |
| Primers | IDT-DNA | PCR | |
| Proteinase K | ThermoFisher Scientific | 25530049 | Biología molecular |
| 2x PCR PreMix, with dye (red) | Sydlab | MB067-EQ2R | Biología molecular |
| MKRS/TB6B | Kornberg lab | Fly line | |
| CO2 station | Genesee Scientific | 59-122WCU | fly pushing |
| Stereo microscope | Olympus | SZ-61 | fly pushing |
| Microtube homogenizing pestles | Fisher-Scientific | 03-421-217 | genomic DNA isolation |
Citar este artículo
Screening for Genomic Modifications: A Method to Identify CRISPR-Generated Mutants in Drosophila. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20110, doi: (2023).