فحص التعديلات الجينومية: طريقة لتحديد المسوخ التي تم إنشاؤها بواسطة CRISPR في دروسوفيلا
Published: April 30, 2023
Abstract
المصدر: دو، L.، وآخرون استراتيجية فعالة لتوليد أنظمة النسخ الثنائية الخاصة بالأنسجة في Drosophila عن طريق تحرير الجينوم. ج. فيس إكسب. (2018).
يصف هذا الفيديو طريقة فحص لتحديد ذباب الدروزوفيلا المعدل وراثيا، والذي تم تعديل جينومه باستخدام CRISPR-Cas9. CRISPR-Cas9 هي أداة قوية لتحرير الجينوم أحدثت ثورة في الطريقة التي يمكن للعلماء التلاعب بها جينوم الكائن الحي. في بروتوكول المثال ، سنرى كيفية تحديد المسوخ التي تم إنشاؤها بواسطة CRISPR ، حيث يحل إدراج تسلسل عملية التحويل محل أول إكسون من الجين(bnl) بدون فروع ، وبالتالي إنشاء خط برنامج تشغيل خاص بالجين bnl ، bnl-LexA.
Protocol
هذا البروتوكول هو مقتطف من Du et al.,استراتيجية فعالة لتوليد أنظمة نسخ ثنائية خاصة بالأنسجة في Drosophila بواسطة تحرير الجينوم، J. Vis. Exp. (2018). 1. يطير علم الوراثة والفحص (الشكل 1 والشكل 2) عندما تتطور الأجنة المحقونة إلى بالغين ، عبر كل ذباب G0 واحد إلى الذباب الم…
Representative Results
الشكل 1: نظرة عامة على سير العمل لتحرير الجينوم CRISPR/Cas9 بوساطة لإنشاء نظام نسخ ثنائي. يتم الإشارة إلى المدة الزمنية التقريبية المطلوبة لكل خطوة. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم….
Materials
| Tris-HCl | Sigma Aldrich | T3253 | Biología molecular |
| EDTA | Sigma Aldrich | E1161 | Biología molecular |
| NaCl | Sigma Aldrich | S7653 | Biología molecular |
| UltraPure DNase/RNase-Free Water | ThermoFisher Scientific | 10977-023 | Biología molecular |
| Primers | IDT-DNA | PCR | |
| Proteinase K | ThermoFisher Scientific | 25530049 | Biología molecular |
| 2x PCR PreMix, with dye (red) | Sydlab | MB067-EQ2R | Biología molecular |
| MKRS/TB6B | Kornberg lab | Fly line | |
| CO2 station | Genesee Scientific | 59-122WCU | fly pushing |
| Stereo microscope | Olympus | SZ-61 | fly pushing |
| Microtube homogenizing pestles | Fisher-Scientific | 03-421-217 | genomic DNA isolation |
Citar este artículo
Screening for Genomic Modifications: A Method to Identify CRISPR-Generated Mutants in Drosophila. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20110, doi: (2023).