Elektrofysiologiska svar luktsinnet sensoriska nervceller som doftämnen kan mätas på insekter använder en sensillum inspelningar. I den här videon artikel kommer vi att visa hur man utför enstaka sensillum inspelningar i antennerna av vinäger flyga (<em> Drosophila melanogaster</em>) Och maxillary palps av malariamyggan (<em> Anopheles gambiae</em>).
Luktsinnet är viktigt för insekter att hitta mat, kompisar, rovdjur och webbplatser äggläggning 3. Insect lukt sensoriska neuron (OSN) är inneslutna i sensoriska hårstrån som kallas sensilla, som täcker ytan av luktsinnet organ. Ytan på varje sensillum är täckt med små porer, genom vilka doftämnen passerar och lös i en vätska som kallas sensillum lymfa, som badar sensoriska dendriter av OSN inrymt i en given sensillum. Den OSN dendriter uttrycka luktreceptor (OR) proteiner, som i insekter fungera som lukt-jonkanaler 4, 5. Samspelet mellan odörer med yttersta randområdenas antingen ökar eller minskar den basala eldhastighet av OSN. Denna nervaktivitet i form av aktionspotentialen förkroppsligar den första representationen av kvalitet, intensitet och tidsmässiga egenskaper luktämnen 6, 7.
Med tanke på den lätt tillgång till dessa sensoriska hårstrån, är det möjligt att utföra extracellulära inspelningar från enstaka OSN genom att införa en inspelning elektroden i sensillum lymfan, medan referensvärdet elektroden placeras i lymfan i ögat eller kroppen av insekter. I Drosophila, sensilla hus mellan en och fyra OSN, men varje OSN visar vanligtvis en karakteristisk spik amplitud. Spike sortering teknik gör det möjligt att tilldela tillsatta svar på enskilda OSN. Denna enda sensillum inspelning (SSR) teknik övervakar skillnaden i potential mellan sensillum lymfan och referenselektrod som elektrisk spikes som genereras av receptorn aktivitet på OSN 1, 2, 8. Förändringar i antalet spikar som svar på luktämnen representera cellulära grund av lukt kodning i insekter. Här beskriver vi förberedelserna metod som för närvarande används i vårt laboratorium för att utföra SSR på Drosophila melanogaster och Anopheles gambiae, och visa representativa spår orsakade av doftämnen i en sensillum-specifika sätt.
Lukt signaler används av organismer för att identifiera födokällor, potentiella kompisar och rovdjur. Olfactory sensoriska neuron (OSN) är det första reläet centrum mellan yttre stimuli och högre centra i hjärnan där informationen bearbetas ytterligare. I Drosophila melanogaster och Anopheles gambiae, OSN är lättillgängliga och deras elektriska aktivitet kan övervakas samtidigt stimuleras av lukt puffar.
Den enda sensillum inspelningen (SSR) teknik som beskriv…
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Paraffin oil | Odors | Fluka | 76235 | |
High purity odors (>98%) | Odors | Sigma-Aldrich | Methyl acetate #296996 1-octen-3-ol #74950 |
|
Filter paper strips | Odors | Fisherbrand | 05-714-1 | Chromatography paper |
Connectors | Odors | Cole-Parmer | EW-06365-40 | 1/16×1/8″ |
Glass vials | Odors | Agilent Technologies | 5182-0556 | |
Air line plastic tubing | Odor Delivery | Python Products | 500PAL | |
1 serological pipette | Odor Delivery | Corning | 4101 | 10 mL |
Plastic tubing | Odor Delivery | Cole-Parmer | EW-06418-0 | 0.050″x0.090″OD |
Disposable borosilicate glass Pasteur pipettes | Odor Delivery | FisherBrand | 13-678-20A | 5-3/4 inches |
Programmable stimulus controller | Odor Delivery | Syntech | CS-55 | |
Anti-vibration table | Electrophysiology Equipment | TMC | 63533 | 36”Wx30”Dx29”H |
Faraday cage | Electrophysiology Equipment | TMC | MI8133303 | |
Inverted microscope | Electrophysiology Equipment | Nikon | E600FN ECLIPSE | Recording microscope |
10x and 100x objectives | Electrophysiology Equipment | Nikon | 10x Plan Fluor 100x L Plan | |
Dissecting microscope | Electrophysiology Equipment | Nikon | EZ645 | electrode sharpening/insect prep microscope |
Magnetic stands | Electrophysiology Equipment | Newport | MODEL 150 | |
IDAC | Electrophysiology Equipment | Syntech | IDAC-4 | |
Acquisition software | Electrophysiology Equipment | Syntech | Autospike | |
1 macromanipulator | Electrophysiology Equipment | NARISHIGE | MN-151 | Joystick manipulator Used for positioning reference electrode |
1 micromanipulator | Electrophysiology Equipment | EXFO | PCS-6000 | Used for positioning recording electrode |
Crocodile clip | Electrophysiology Equipment | Pomona | AL-B-12-0 | |
Electric cable | Electrophysiology Equipment | Pomona | B-36-0 | Test Cable Assembly |
2 electrode holders | Electrophysiology Equipment | Syntech | N/A | Electrode holders (set of 2) for tungsten wire electrode |
AC probe | Electrophysiology Equipment | Syntech | N/A | Universal single ended probe (10xAC) |
Tungsten electrodes | Electrophysiology Equipment | Microprobes | M210 | straight tungsten rods, 0.005“x3“ |
Potassium hydroxide | Electrophysiology Equipment | Sigma-Aldrich | 221473 | |
Syringe | Electrophysiology Equipment | BD | 301625 | 20 mL |
Power supply | Electrophysiology Equipment | WILD HEERBRUGG 6V 40W | e.g MTR32 | |
Vertical puller | Insect prep | Narishige | PB-7 | |
Razor blade | Insect prep | VWR | 55411-050 | |
Dental wax | Insect prep | Patterson | 091-1503 | |
Microscope slide | Insect prep | FisherBrand | 12-550A | |
Cover glass | Insect prep | FisherBrand | 12-541A | 18X18 #1.5 |
Polypropylene mesh | Insect prep | Small Parts inc. | CMP-0500-B | |
Glass electrode | Insect prep | Frederick Haer & Co. | 27-32-0-075 | Capillary tubing borosilicate 1.5mm OD x 1.12mm ID x 75 mm |
Double-sided tape (3M) | Insect prep | 3M | MMM6652P3436 | Double-sided tape (3M) |
Forceps | Insect prep | Fine Science Tools | 021×0053 | Dumont #5 Mirror Finish Forceps |
Small plastic cup | Insect prep | VWR | 89009-662 | 7 x 5.7 (23/4 x 21/4) |
Electric aspirator | Insect prep | Gempler’s | RHM200 |