Odorants घ्राण संवेदी न्यूरॉन्स के electrophysiological प्रतिक्रियाओं एकल sensillum रिकॉर्डिंग का उपयोग कीड़े में मापा जा सकता है. हम इस वीडियो लेख में प्रदर्शन होगा कि कैसे सिरका मक्खी के एंटीना में एक sensillum रिकॉर्डिंग प्रदर्शन करने के लिए (<em> ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</em>) और मलेरिया के मच्छर के दाढ़ की हड्डी का palps (<em> एनोफ़ेलीज़ gambiae</em>).
गंध की भावना के कीड़ों के लिए आवश्यक खाद्य पदार्थ, साथी, शिकारियों, और oviposition 3 साइटों को खोजने. कीट घ्राण संवेदी न्यूरॉन्स (OSNs) संवेदी sensilla नामक बाल, जो घ्राण अंगों की सतह को कवर में संलग्न हैं. प्रत्येक sensillum की सतह छोटे pores के साथ कवर किया जाता है, जिसके माध्यम से odorants पास बुलाया sensillum लसीका तरल पदार्थ है, जो एक दिया sensillum में रखे OSNs का संवेदी dendrites bathes में भंग. OSN dendrites odorant रिसेप्टर प्रोटीन (या) एक्सप्रेस, जो गंध gated आयन चैनल 4, 5 के रूप में कीड़े समारोह में. अन्य रैंकों या तो बढ़ जाती है के साथ odorants की बातचीत या OSN के बेसल फायरिंग दर घट जाती है. कार्रवाई क्षमता के रूप में इस neuronal गतिविधि गुणवत्ता, तीव्रता, और odorant 6, 7 के लौकिक विशेषताओं की पहली प्रतिनिधित्व का प्रतीक हैं.
इन संवेदी बाल करने के लिए आसान पहुँच को देखते हुए, यह संभव है sensillum लिम्फ में एक रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड शुरू, जबकि संदर्भ इलेक्ट्रोड या कीट की आंख और शरीर के लिम्फ में रखा गया है द्वारा एकल OSNs से कोशिकी रिकॉर्डिंग प्रदर्शन है. प्रत्येक OSN ड्रोसोफिला, एक और चार OSNs के बीच sensilla घर, लेकिन आम तौर पर एक विशेषता स्पाइक आयाम प्रदर्शित करता है. स्पाईक छँटाई तकनीक यह व्यक्तिगत OSNs spiking प्रतिक्रियाओं असाइन करने के लिए संभव बनाते हैं. यह एकल sensillum रिकॉर्डिंग तकनीक (SSR) sensillum लसीका और बिजली spikes है कि OSNs 1, 2, 8 पर रिसेप्टर गतिविधि द्वारा उत्पन्न कर रहे हैं के रूप में संदर्भ इलेक्ट्रोड के बीच क्षमता में अंतर पर नज़र रखता है. Spikes के संख्या में odorant के जवाब में परिवर्तन कीड़ों में कोडन गंध के सेलुलर आधार का प्रतिनिधित्व करते हैं. यहाँ, हम तैयारी वर्तमान में हमारी प्रयोगशाला में प्रयोग किया जाता ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर और एनोफ़ेलीज़ gambiae SSR प्रदर्शन विधि का वर्णन है, और प्रतिनिधि sensillum विशेष तरीके में odorants द्वारा प्रेरित निशान दिखाने.
घ्राण cues जीवों द्वारा उपयोग किया जाता है खाद्य स्रोतों, संभावित साथियों, और शिकारियों की पहचान कर रहे हैं. घ्राण संवेदी न्यूरॉन्स (OSNs) बाह्य stimuli और मस्तिष्क जहां जानकारी संसाधित है आगे की उच्चतर केन्द्रो…
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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Paraffin oil | Odors | Fluka | 76235 | |
High purity odors (>98%) | Odors | Sigma-Aldrich | Methyl acetate #296996 1-octen-3-ol #74950 |
|
Filter paper strips | Odors | Fisherbrand | 05-714-1 | Chromatography paper |
Connectors | Odors | Cole-Parmer | EW-06365-40 | 1/16×1/8″ |
Glass vials | Odors | Agilent Technologies | 5182-0556 | |
Air line plastic tubing | Odor Delivery | Python Products | 500PAL | |
1 serological pipette | Odor Delivery | Corning | 4101 | 10 mL |
Plastic tubing | Odor Delivery | Cole-Parmer | EW-06418-0 | 0.050″x0.090″OD |
Disposable borosilicate glass Pasteur pipettes | Odor Delivery | FisherBrand | 13-678-20A | 5-3/4 inches |
Programmable stimulus controller | Odor Delivery | Syntech | CS-55 | |
Anti-vibration table | Electrophysiology Equipment | TMC | 63533 | 36”Wx30”Dx29”H |
Faraday cage | Electrophysiology Equipment | TMC | MI8133303 | |
Inverted microscope | Electrophysiology Equipment | Nikon | E600FN ECLIPSE | Recording microscope |
10x and 100x objectives | Electrophysiology Equipment | Nikon | 10x Plan Fluor 100x L Plan | |
Dissecting microscope | Electrophysiology Equipment | Nikon | EZ645 | electrode sharpening/insect prep microscope |
Magnetic stands | Electrophysiology Equipment | Newport | MODEL 150 | |
IDAC | Electrophysiology Equipment | Syntech | IDAC-4 | |
Acquisition software | Electrophysiology Equipment | Syntech | Autospike | |
1 macromanipulator | Electrophysiology Equipment | NARISHIGE | MN-151 | Joystick manipulator Used for positioning reference electrode |
1 micromanipulator | Electrophysiology Equipment | EXFO | PCS-6000 | Used for positioning recording electrode |
Crocodile clip | Electrophysiology Equipment | Pomona | AL-B-12-0 | |
Electric cable | Electrophysiology Equipment | Pomona | B-36-0 | Test Cable Assembly |
2 electrode holders | Electrophysiology Equipment | Syntech | N/A | Electrode holders (set of 2) for tungsten wire electrode |
AC probe | Electrophysiology Equipment | Syntech | N/A | Universal single ended probe (10xAC) |
Tungsten electrodes | Electrophysiology Equipment | Microprobes | M210 | straight tungsten rods, 0.005“x3“ |
Potassium hydroxide | Electrophysiology Equipment | Sigma-Aldrich | 221473 | |
Syringe | Electrophysiology Equipment | BD | 301625 | 20 mL |
Power supply | Electrophysiology Equipment | WILD HEERBRUGG 6V 40W | e.g MTR32 | |
Vertical puller | Insect prep | Narishige | PB-7 | |
Razor blade | Insect prep | VWR | 55411-050 | |
Dental wax | Insect prep | Patterson | 091-1503 | |
Microscope slide | Insect prep | FisherBrand | 12-550A | |
Cover glass | Insect prep | FisherBrand | 12-541A | 18X18 #1.5 |
Polypropylene mesh | Insect prep | Small Parts inc. | CMP-0500-B | |
Glass electrode | Insect prep | Frederick Haer & Co. | 27-32-0-075 | Capillary tubing borosilicate 1.5mm OD x 1.12mm ID x 75 mm |
Double-sided tape (3M) | Insect prep | 3M | MMM6652P3436 | Double-sided tape (3M) |
Forceps | Insect prep | Fine Science Tools | 021×0053 | Dumont #5 Mirror Finish Forceps |
Small plastic cup | Insect prep | VWR | 89009-662 | 7 x 5.7 (23/4 x 21/4) |
Electric aspirator | Insect prep | Gempler’s | RHM200 |