/

Immunologie und Infektion

/

基因敲击由CRISPR/Cas9和细胞排序在巨噬细胞和T细胞线

JoVE Journal
Immunologie und Infektion
Author Produced

Zum Anzeigen dieser Inhalte ist ein JoVE-Abonnement erforderlich. Melden Sie sich an oder starten Sie Ihre kostenlose Testversion.

JoVE Journal Immunologie und Infektion

Gene Knock-in by CRISPR/Cas9 and Cell Sorting in Macrophage and T Cell Lines

Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

基因敲击由CRISPR/Cas9和细胞排序在巨噬细胞和T细胞线

DOI:

10.3791/62328-v

•

11:32 min

•

November 13, 2021

•

Lichen Zhang, Rong Huang, Liaoxun Lu, Rui Fu, Guo Guo, Yanrong Gu, Zhuangzhuang Liu, Le He, Marie Malissen, Yinming Liang

¹The Laboratory of Genetic Regulators in the Immune System, School of Laboratory Medicine,Xinxiang Medical University, ²Centre d’Immunologie de Marseille-Luminy,Aix Marseille Université

Kapitel

00:05Introduction
00:32Design and Plasmid Construction of sgRNAs Targeting Rosa26 Locus
02:28Design and Construction of Targeting Vector as Homologous Recombination Template
03:46Electroporation of Macrophage and T Cell Lines
07:19Cell Sorting to Isolate Putative Knock-in Cells
08:58Screening and Validation of Positive Knock-in Cells
10:16Representative Results
10:52Conclusion

Summary

Automatische Übersetzung

该协议使用荧光记者和细胞分拣来简化巨噬细胞和T细胞系的敲击实验。两个质粒用于这些简化的敲击实验，即CRISPR/Cas9-和DsRed2表达质粒和同源重组供体质粒表达EBFP2，这是永久整合在 Rosa26 点在免疫细胞。

Tags

CRISPR/Cas9 Gene Knock-in Macrophage T Cell Lines ROSA26 Locus SgRNA Design Homologous Recombination Targeting Vector Fluorescent Reporter Cell Sorting

Article

Embed

ZUR WIEDERGABELISTE HINZUFÜGEN

Usage Statistics

Verwandte Videos

特定细胞群的净化荧光激活细胞分选（FACS）

T细胞受体在小鼠T细胞的逆转录病毒转导

胸腺淋巴瘤的T细胞系的推导 ATM^{- / -</sup} P53^{- / -</sup}鼠标

β细胞死亡介导细胞毒性T淋巴细胞的方法来评估

Multivirus特异性T细胞的生成，预防/治疗异基因造血干细胞移植后的病毒感染

扩大目标，脐血细胞毒性T淋巴细胞，巨细胞病毒，EB病毒，腺病毒

piggyBac转座子初级人类T细胞系统改造

鼠标朴素CD4<sup> +</sup> T细胞分离和<em>在体外</em>分化为T细胞亚群

使用"桅杆细胞敲击"小鼠分析体内桅杆细胞的功能

慢性活性泼斯坦-巴尔病毒感染患者 NK 和 T 细胞系建立的高效简便方法

Read Article