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CRISPR/Cas9による遺伝子ノックインとマクロファージおよびT細胞株における細胞分類
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Immunologie und Infektion
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JoVE Journal Immunologie und Infektion
Gene Knock-in by CRISPR/Cas9 and Cell Sorting in Macrophage and T Cell Lines
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CRISPR/Cas9による遺伝子ノックインとマクロファージおよびT細胞株における細胞分類

9,783 Views

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11:32 min

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November 13, 2021

DOI:

10.3791/62328-v

DOI:
10.3791/62328-v

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11:32 min
November 13, 2021

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1The Laboratory of Genetic Regulators in the Immune System, School of Laboratory Medicine,Xinxiang Medical University, 2Centre d’Immunologie de Marseille-Luminy,Aix Marseille Université

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このプロトコルは、蛍光レポーターと細胞分類を使用して、マクロファージおよびT細胞株におけるノックイン実験を簡素化します。これらの単純なノックイン実験、すなわちCRISPR/Cas9-およびDsRed2発現プラスミドと、免疫細胞内の Rosa26 遺伝子座に永久に統合されたEBFP2を発現する相同組換えドナープラスミドの2つのプラスミドが使用されます。

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CRISPR/Cas9Gene Knock-inMacrophageT Cell LinesROSA26 LocusSgRNA DesignHomologous RecombinationTargeting VectorFluorescent ReporterCell Sorting

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Zhang, L., Huang, R., Lu, L., Fu, R., Guo, G., Gu, Y., Liu, Z., He, L., Malissen, M., Liang, Y. Gene Knock-in by CRISPR/Cas9 and Cell Sorting in Macrophage and T Cell Lines. J. Vis. Exp. (177), e62328, doi:10.3791/62328 (2021).

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