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Combining Laser Capture Microdissection and Microfluidic qPCR to Analyze Transcriptional Profiles of Single Cells: A Systems Biology Approach to Opioid Dependence

Combinando microdissecção de captura a laser e qPCR microfluido para analisar perfis transcricional de células únicas: uma abordagem de biologia de sistemas para dependência de opióides

DOI:
10.3791/60612-v

•

09:54 min

•

March 08, 2020

•

, , , ,
1Daniel Baugh Institute for Functional Genomics and Computational Biology, Department of Pathology, Anatomy, and Cell Biology,Thomas Jefferson University, 2Sidney Kimmel Medical College,Thomas Jefferson University, 3Department of Pharmacology & Physiology,Drexel University College of Medicine

Kapitel

  • 00:05Introduction
  • 00:59Preparing the Samples
  • 02:16Laser Capture Microdissection
  • 04:07Single-cell Microfluidic RT-qPCR
  • 08:08Results: Microfluidic qPCR Yields Accurate and Anatomically Specific Transcriptional Profiles of Single-Cells
  • 09:21Conclusion

Summary

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Este protocolo explica como coletar neurônios únicos, microglia e astrócitos do núcleo central da amígdala com alta precisão e especificidade anatômica usando microdissecção de captura a laser. Além disso, explicamos nosso uso de RT-qPCR microfluido para medir um subconjunto do transcriptome dessas células.

Tags

Laser Capture MicrodissectionMicrofluidic QPCRTranscriptional ProfilesSingle CellsSystems BiologyOpioid DependenceGene ExpressionCellular SubphenotypesAnatomic SpecificityBiological ProblemsNeuronsBrain RegionsAmygdalaEthanol DehydrationXyleneFluorescenceLCM SoftwareInfrared Laser

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