Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
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Transcript
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Per iniziare, posizionare un topo anestetizzato su un letto chirurgico e iniettare buprenorfina, un analgesico per alleviare il dolore, per via sottocutanea nella spalla. Successivamente, inserire il naso del mouse in una maschera per il naso per fornire un apporto continuo di ossigeno e anestetico, come l'isoflurane all'animale. Usando del nastro da laboratorio, immobilizzare gli arti e sterilizzare la pelle del torace con clorexidina e iodio, due disinfettanti ed etanolo.
Ora usa le forbici per fare un'incisione al centro della parete anteriore del torace e invertire la pelle con le flessione per esporre il cuscinetto grasso mammario bianco. Iniettare con cura la sospensione delle cellule tumorali esprimendo una proteina bioluminescente nel cuscinetto grasso mammario. Attendere 5 secondi prima di estrarre l'ago per evitare il riflusso. Rilasciare delicatamente il cuscinetto grasso e utilizzare suture sterili per cucire e chiudere l'incisione.
Le cellule tumorali iniettate all'interno del cuscinetto grasso mammario si dividono rapidamente per formare un tumore. Riportare l'animale in una gabbia dopo la procedura. Monitorare da vicino l'animale fino a quando non si riprende dall'anestesia e inizia a muoversi liberamente.
Nel seguente protocollo, impianteremo cellule di adenocarcinoma mammario che esprimono luciferasi nel cuscinetto grasso mammario di un topo adulto.
Inizia confermando la mancanza di risposta al dito del piedi in un topo femmina anestetizzato e toccando gli arti dell'animale su una tavola chirurgica. Utilizzando tamponi di cotone sterili, sterilizzare l'area chirurgica con clorexidina, iodio e 75% di etanolo e fare un'incisione cutanea di cinque millimetri al centro della parete anteriore del torace. Quindi, sollevare il lato destro della pelle adiacente all'incisione e utilizzare forbici sterili di microdisezione per staccare la pelle dalla parete toracica.
Invertire la pelle per esporre il cuscinetto grasso mammario numero due giusto e utilizzare una siringa per insulina da un millilitro dotata di un ago calibro 28,5 per iniettare con cura 20 microlitri di sospensione delle cellule tumorali attraverso la ferita nel cuscinetto grasso. Tenere l'ago all'interno del tampone grasso per cinque secondi per consentire alla miscela proteica delle cellule tumorali gelatinose di solidificarsi prima di rimuovere l'ago e chiudere l'incisione con suture sterili 5-0 non assorbibili. Quindi, posizionare l'animale in una gabbia pulita con monitoraggio fino alla piena recumbency.
