Zhuang Medicineの薬用糸灸療法と原発性月経困難症の冷凝固症候群のラットモデルにおけるその応用

本研究の動物実験は、広西チワン族自治区中医薬大学の動物実験倫理委員会(倫理ライセンス番号DW20230411-45)によって審査され、承認されました。動物の操作手順は、実験動物の治療に関する指導意見書(Guo Ke Fa Cai Zi [2006] No. 398)の内容と、国際疼痛研究学会(IASP)の動物保護および使用基準に厳密に従っています。 注:この研究では、体重が200 g±20 gの6週齢のSPFグレードの雌ラットが使用されました。発情期のラットを膣塗抹標本に基づいて選抜し、乱数法を用いて4つの群に分けた。それらは、車両グループ、冷凝固型月経困難症モデルグループ(モデルグループ)、冷凝固型月経困難症モデルグループ+西洋医学グループ(医学グループ)、寒冷凝固型月経困難症モデルグループ+荘薬ライン灸グループ(灸グループ)に分けられ、各グループに12匹のラットがいます。車両グループ:動物を生理食塩水(0.9%塩化ナトリウム)で処理しました。モデル群:寒冷凝固症候群月経困難症モデルのモデリング過程では、介入は行われず、灸群と同じ拘束と固定のみが実施されました。薬品群:感作6日目から 、0.9%塩化ナトリウム溶液に溶解したイブプロフェンを毎日強制経口投与した。各ラットに0.06g / kgを与えました。灸群:感作6日目から 、Zhuang薬糸による毎日の灸治療を行いました。このグループは、1日1回午前8時に7日間連続して治療を受けました。すべての動物は、広西チワン族自治区国際荘医院の実験動物科学センターで飼育されています(クリーンレベル)。ラットはプラスチック製のケージに入れられ、1つのケージに4匹のラットが入っていました。彼らは普通に食べたり飲んだりし、概日リズムを交互に保ち、室内では乾燥しているべきです。室温は23±1°Cに制御され、湿度は60%±5%でした。 1. 寒冷凝固症候群を合併した月経困難症のラットモデルの確立 凍結:1〜12日目に、0.3%ペントバルビタール(30 mg / kg)の腹腔内注射でラットに麻酔をかけ、その後、12日間連続して毎日20分間氷の上に置きます。 感作:1〜12日目に、ラットに安息香酸エストラジオールを皮下注射して、痛みの原因となる物質に対する子宮の感受性を高めます。.1日目 と12日目 に、動物あたり0.8mgを注射します。2日目 から11日目に 、0.4 mg /動物を注射します。. 疼痛誘発:安息香酸エストラジオールの注射から1時間後の12日目に 、ラットに2Uのオキシトシンを腹腔内に注射し、痛みを引き起こします。注:モデルは、安息香酸エストラジオールとオキシトシン注射10を組み合わせた全身凍結法を使用して作成されました。 各動物グループは、手順 1.4.1 から 1.4.4 で説明されているように扱います。車両グループ内のラットについては、手順1.1〜1.3を実行しないでください。生理食塩水(0.9%塩化ナトリウム)のみで治療します。 モデルグループ内のラットについて、手順 1.1 から 1.3 を実行します。グループ内の動物を灸群と同様の方法で拘束しますが、薬物/治療の介入はありません。 薬群のラットについては、手順1.1〜1.3を実行します。感作の6日目 (ステップ1.2)から、イブプロフェンを0.9%塩化ナトリウム溶液に溶解し、毎日(0.06 g / kg)強制経口投与します。. 灸群のラットについては、手順1.1〜1.3を実行します。感作6日目( ステップ1.2)から、Zhuang薬糸(セクション4)による灸治療を1日1回午前8時に7日間連続して行います。 2.Zhuang薬糸の灸シミュレーターの設定 ボタン1を長時間押し続けると、設定状態になります。ボタン2(プラス)またはボタン3(マイナス)を短く押すと、132コードが表示されます。ボタン入力を押すたびに0.5cm出力するように設定します。 コード2.1が表示されるまで手順130を繰り返し、デバイスは点火後6秒以内に自動的に発火できます。 コード131が表示されるまで手順2.1を繰り返し、機器は自動的に灸を2回実行します。 速度制御ボタンを回して、周波数を2回/秒に設定します。メモ: ボタン番号の詳細については、 補足図1を参照してください。 3.荘薬糸の準備 薬用酒の調製さまざまな病気の治療に応じて薬用酒の構成を選択します。この実験では、フランキンセンス10g、サンダルウッド10g、ウッディインセンス10g、ピーチカーネル10g、ベニバナ10g、Angelica sinensisテール10g、ファンフェン10g、赤牡丹10g、スム10g、ドライジンジャー10g、ターメリック10gを使用しました。これらの成分を1000mLの75%アルコールに浸し、10日後にろ過して薬液を形成します。 薬用糸を浸す:ラミー糸を上記の薬液に少なくとも10日間浸し(図2)、薬用糸を取り出して灸にし、薬用糸をボトルに密封して後で使用します。 薬用糸は、毎回約21cmの長さの糸を取り出してご使用ください(図3)。 4. Zhuang medicine糸灸の介入方法 ツボの選択注: ラットは、0.3% ペントバルビタール (30 mg/kg) の腹腔内注射によって麻酔されます。小動物用シェービングマシンを使用して、ラットの腹部の毛をきれいにします。 糸灸による月経困難症の治療経験に基づいて、Shenque、Guanyuan、Zhongji、Uterineのツボなど、11,12,13のツボを選択します。マーカーを使用して、ラットの下腹部に上記のツボをマークします。.注意: ツボについては、 図4 を参照してください。シェンクエ(CV8、剣状突起と恥骨結合の上端を結ぶ線の上部2/3と下部1/3の交点);関元(CV4、シェンクツボの下25 mm);Zhong ji(CV3、関元ツボの下8 mm);左子宮ツボ(左、EX-CA1、中済ツボの左側に25 mm開口)。右子宮ツボ(右、EX-CA1、中済ツボの右側に25mm開口)。 ネズミの固定伸縮性の高いゴムバンド(アクリル板サイズ10cm×15cm×5cm)を使用して透明なアクリル板にラットを固定し、腹部を露出させます。 固定されたラットをZhuang Medicine Line Moxibustionシミュレーターの手術台に置き、ラットの腹部に付着するようにポジショニングリングを調整し、ラットの位置を左右に調整して、1つのマークされたツボがポジショニングリングの中央に配置されるようにします(図5)。 薬用ラインの配置浸した薬糸を1本取り出し、薬糸コントロール装置に挿入します。 サポートフレームの垂直軸と水平軸でネジノブを回転させます。薬剤ライン制御装置のシェルを上下に調整して、シェルの底部とポジショニングリングの底部との間の距離が2cmになるように(図6)、それに応じてイグニッションサポートシャフトとポジショニングロッドシャフトを調整します。 ワイヤー挿入ボタンをクリックして、薬ワイヤーをシェルから0.5 cm露出させます(プレスごとにワイヤー端を0.5 cm出口に設定します)(図7)。 ポイント灸イグニッションボタンを押すと、イグニッションデバイスが自動的に点火します。デフォルトのタイミングは 6 秒です。その後、自動灸は2回/秒に設定された周波数で2回行われます(図8)注:温度が23±1°C、湿度が60%±5%の無風環境では、6秒後にビーズ火災が発生する可能性があることが以前に繰り返しテストされています。 ツボの灸後、透明なアクリルフレームを動かして位置を調整し、次に灸が必要なツボが位置決め円の中心にくるようにします。手順 4.3.3 と 4.4.1 を繰り返します。 5. ねじりスコアリング操作 ラットにオキシトシン(2U)を注射し、空のケージに入れます。 20分以内に各ラットのねじれ応答を観察します。注:車両グループを除き、各グループごとに6匹のラットが選択されました。ねじれ反応が起こると、原発性月経困難症モデルはラットで成功裏に確立されました14。生理食塩水群には、等量の生理食塩水を注射しました。Schmauss15によって提案された行動スコアリングは、この研究で使用されました:通常の探索行動の場合、0ポイント。胴体は片側に傾いており、腹部は収縮のために内側に凹んでいます、1ポイント。後肢の伸展、後肢の背屈、骨盤の回転を伴う体幹の伸展、2点;腹筋の収縮、後肢の伸展、3点(図9) 潜時、ひねり回数、ひねり反応のひねりスコアはすべて20分以内に記録されました。ラットの悶えの潜伏期間は、オキシトシン注射(痛みを引き起こす)からラットの悶え反応が最初に現れるまでの時間(分)です。ツイストスコア=[0レベル(回数)×0ポイント+1レベル(頻度)×1ポイント+2レベル(頻度)×2ポイント+3レベル(頻度)×3ポイント]。 6.赤外線熱画像 各グループの残りの 6 匹のラットに 0.3% ペントバルビタール 30 mg/kg の腹腔内注射で麻酔をかけ、子宮突起領域を露出させます。 手術後、ラットを赤外線サーマルイメージャーレンズの視野に置き、赤外線サーマルイメージャーを使用して子宮投影領域の温度を記録します。 各ツボを3回測定し、そのツボの温度として平均値を取ります。 赤外線画像ソフトウェアを使用して赤外線熱画像をエクスポートします(図10)。注:モデリングの12日目 (すなわち、介入の7日目 )に、各グループの残りの6匹のラットを赤外線熱画像観察にさらしました。寒冷凝固症候群の原発性月経困難症ラットは、子宮の表面投影温度の低下を経験します。ラットの子宮の表面投影温度を観察することで、寒冷凝固症候群の重症度を判断できます。温度が低いほど、寒冷凝固症候群はより深刻です。