免疫刺激性剂评价: 淋巴组织提取与注射路径依赖性树突状细胞活化
Summary
在 immunostimulating 纳米材料治疗后, 对淋巴组织进行后续提取实验, 以检测淋巴树突状细胞活化。
Abstract
为评估一种新的免疫治疗药物或疫苗接种, 分析淋巴组织中的免疫细胞活化是必不可少的。在这里, 我们研究了一种新的脂质 DNA immunostimulant 在纳米粒形态中的免疫效应, 从小鼠的不同管理途径: 口服, 鼻腔, 皮下, 都安, 腹腔和静脉。这些注射将直接影响免疫反应, 收获淋巴组织和分析的树突状细胞 (DC) 激活的组织是这些评价的关键部分。纵隔淋巴结的提取 (mLNs) 是重要的, 但由于该器官的大小和位置而相当复杂。本文介绍了用流式细胞仪采集腹股沟淋巴结 (iLN)、mLN 和脾脏的逐步过程, 并分析了直流活化的方法。
Introduction
免疫学和纳米材料的进步导致了大量的潜在的新的治疗策略应用于生物医学, 包括药物的传递和免疫刺激。优化管理路径是影响免疫刺激性剂疗效的重要方面。由 dna 组成的免疫刺激性纳米粒子 (相) 是一种新研制的纳米免疫佐剂, 自组装而成, 其两亲性结构为脂 dna1。因此, 涉及在体内通过不同途径管理物质1的方案, 以及三种采集适当组织的程序, 如腹股沟淋巴结 (iLN)、纵隔 LN (mLN) 和脾脏, 都是描述。最后, 对这些组织进行了树突状细胞 (DC) 活化、免疫系统中功能最强的抗原呈现细胞的分析。该协议也可用于评估抗原, 抗体, 或其他免疫佐剂2。
我们测试了它的配方, 因为它是一个显示了巨大的承诺的代理。核核是一种类似于收费的受体 9 (TLR9) 佐剂材料, 含有核酸, 对免疫刺激疗效的评估需要测试不同的注射方法3。在这种情况下, 对 DCs 的刺激是体内评价的一个有效端点。在抗原或免疫刺激性分子由 DCs 吞噬的外围组织或血液, 这些细胞迁移到淋巴器官, 如脾脏和 LNs4,5。因此, 对注射动物的脾脏、iLN 和 mLN 进行了 DC 活化分析。因此, 适当地收割这些组织对评估免疫应答的新的佐剂或病原体也是至关重要的5。这种组织收获对于开发一种新的免疫方法作为癌症治疗也很重要。此外, 该议定书可用于验证其他药物的效率, 如抗人体免疫机能丧失病毒疗法6。
Protocol
Representative Results
Discussion
通过药物传递和免疫刺激的治疗研究, 纳米技术和免疫学取得了许多进展。仔细选择注射方法对免疫刺激是很重要的, 这是目前研究的重点。
对一种天然无毒和可生物降解的基于 DNA 的材料 (免疫刺激性纳米粒子) 进行了不同的注射路线评估, 以确定哪条路线取得了最佳结果。这种方法也适用于提供其他治疗药物, 包括抗体, 抗原, 或其他佐剂。
为了分析这种…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项研究得到了由科学、信息和通信技术和未来规划部 (NRF-2017M3D1A1039421) 资助的韩国国家研究基金会 (NRF) 和由由该国资助的海洋生物技术项目提供的创造性材料发现方案的支持。大韩民国海洋和渔业部和赠款 (20150220)。
Materials
| Material | |||
| phosphate buffer saline | Corning | 21-040-CVR | Washing organs |
| (PBS, pH 7.4) | |||
| isoflurane solution | Aesica Queenborough limited | 26675-46-7 | Anesthesia process |
| Tuberculin 1mL syringe – | Junglim | N/A | Injection |
| 50 mL conical tube | S.P.L | 50050 | Anesthesia process |
| 1mL Insulin Syringe | (BD Ultra-FineTMII)_short needle | 324826 | Intramuscular Injection |
| DMEM High Glucose | Hyclone | SH30081.01 | Storing organs |
| Histopaque | Sigma-Aldrich | 10771 | FACS analysis |
| Ethyl alcohol anhydrous 99.5 % | Daejung | 4022-4110 | Disinfectant |
| Equipments | |||
| FineCycler C100 (Thermocycler) | Ssufine | – | Anealing |
| Centrifuge | Centrifuge | ||
| FACS tube | FALCON | 2052 | FACS analysis |
| Automated High-performance Flow Cytometer | BD (USA), FACSVerse | – | FACS analysis |
Referenzen
- Park, H. . Preparation of dodecynyl modified DNA nanoparticles with unmethylated CpG adjuvant and ovalbumin for immunostimulation. , (2016).
- Jin, J. O., Park, H., Zhang, W., de Vries, J. W., Gruszka, A., Lee, M. W., Ahn, D. R., Herrmann, A., Kwak, M. Modular delivery of CpG-incorporated lipid-DNA nanoparticles for spleen DC activation. Biomaterials. 115, 81-89 (2017).
- Pal, I., Ramsey, J. D. The role of the lymphatic system in vaccine trafficking and immune response. Advanced Drug Delivery Reviews. 63 (10-11), 909-922 (2011).
- Jin, J. O., Kwak, M., Xu, L., Kim, H., Lee, T. H., Kim, J. O., Liu, Q., Herrmann, A., Lee, P. C. W. Administration of soft matter lipid-DNA nanoparticle as the immunostimulant via multiple routes of injection in vivo. ACS Biomaterial Science & Engineering. 3 (9), 2054-2058 (2017).
- Worbs, T., Hammerschmidt, S. I., Förster, R. Dendritic cell migration in health and disease. Nature Review Immunology. 17 (1), 30-48 (2017).
- Milling, S. W. F., Jenkins, C., MacPherson, G. Collection of lymph-borne dendritic cells in the rat. Nature Protocols. 1 (5), 2263-2270 (2006).
- Desormeaux, A., Bergeron, M. G. Lymphoid tissue targeting of anti-HIV drugs using liposomes. Methods in Enzymology. 391, 330-351 (2005).
- Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. Manual restraint and common compound administration routes in mice and rats. Journal of Visualized Experiments. (67), (2012).
- Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 50 (5), 600-613 (2011).
- . . General anesthesia of mice and rats. , (2016).
- . . Guidelines for the Euthanasia of Animals. , (2013).
- . JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. Compound Administration I. Journal of Visualized Experiments. , (2018).
- . JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. Compound Administration III. Journal of Visualized Experiments. , (2018).
- Mebius, R. E., Kraal, G. Structure and function of the spleen. Nature Review Immunology. 5 (8), 606-616 (2005).
