Incorporando um grânulo de célula endotelial brotando ensaio pericitos

Angiogênese é vital para a embriogênese apropriado e cicatrização de feridas, e também desempenha papel chave em inúmeras doenças, incluindo câncer doença¹ e artéria coronária de progressão. ^{2 , 3} ter uma melhor compreensão de como a angiogênese ocorre durante o desenvolvimento normal, e como ele é reativado em contextos patológicos, é crítico para o desenvolvimento do romance, terapêutica eficaz. Fiel em vitro modelos que recapitular as etapas importantes e tipos de células envolvidos na angiogênese na vivo são necessários para permitir que os pesquisadores para melhor caracterizar os mecanismos moleculares, dirigindo a angiogênese e fazer novas descobertas no Regulamento endotelial.

Nakatsu e Hughes otimizaram a um ensaio de grânulo brotos que demonstraram ter submetido os vários estágios conhecidos da angiogênese que brota. ^{4 , 5} o objetivo do método apresentado aqui é construir sobre o ensaio otimizado por Nakatsu e Hughes incorporando perictyes para o ensaio, para que as funções parácrina e juxtracrine de células murais na célula endotelial brotação podem ser incorporadas em estudos de romance angiogênese. Pericitos são células murais que são definidas pelo seu papel como células que mantêm fechem contato físico com células endoteliais devido sua sendo incorporado na membrana vascular do porão. ⁶ pericitos e células endoteliais engajar em cruz-conversa complexo através de sinalização de vias, incluindo entalhe sinalização, Ang-Tie2, PDGFRβ, TGFRβ e muitos outros. ^{7 , 8} modelos de Mouse deficientes nessas vias de sinalização demonstram Pericito pobre cobertura de desenvolver vasculatura na embriogênese, levando a remodelação vascular pobre e vasculatura disfuncional. ⁷ além disso, o papel de pericitos em angiogênese patológica é importante, mas muitas vezes subestimado. Por exemplo, uma característica única da vasculatura do tumor é que os vasos são mais imaturos, gotejantes e disfuncional devido à cobertura de pobre Pericito. ⁹ foi proposto que a presença ou ausência de pericitos dramaticamente impacta o fenótipo dos vasos sanguíneos do tumor e é um importante mediador das respostas a terapias antitumorais e antiangiogênica. ⁹ assim, incluindo o papel de pericitos em ensaios em vitro é chave para capturar mais completamente os importantes mecanismos de regulação endotelial.

Embora existam muitos ensaios in vitro e ex vivo atualmente empregados para estudar a angiogênese, existem deficiências a considerar em cada um. Algumas, como a proliferação endotelial e ensaios de migração endotelial, são excessivamente simplificadas e concentrar-se em uma função endotelial em um ambiente isolado na cultura do tecido plástico. ¹⁰ outros ensaios ocorrem num mais 3 dimensional (3D) cenário, tais como o ensaio de formação de tubo Matrigel,¹⁰ mas estes ensaios são ainda muito simplificados e focar mais na capacidade das células endoteliais, migrar e formar de novo vascular estruturas, em oposição a brotação da vasculatura pré-existente. Além disso, nenhum destes ensaios incorporar tipos de células do mural. Há ex vivo modelos tais como o ensaio de aorta do anel que incorporam pericitos presentes no órgão hospedeiro, mas manipulação genética destes modelos é muito mais difícil devido à necessidade de gerar modelos de rato transgénico ou nocaute do percursos de interesse. O grânulo brotando do ensaio é ideal porque ele modela brotando endotelial, proliferação, migração e formação nem anastomose e lúmen em uma matriz 3D. ⁴ o ensaio fielmente permite avaliação mecanicista das muitas diferentes fases de brotação, enquanto ainda permitindo a modificação genética direta das células endoteliais ou pericitos em um ambiente mais controlado. Os coágulos de fibrina contendo os grânulos de germinação podem ser facilmente corrigidos, manchados e fotografados em diferentes fases de brotação; esses brotos também podem ser colocados em uma câmara ao vivo de imagem para executar em tempo real imagens de brotação. A metodologia apresentada aqui é ideal para estudar os mecanismos básicos da angiogênese através na fenotipagem de profundidade e análise exaustiva das vias ativado durante a angiogênese.