Summary

Interações Intravital Microscopia de leucócito-endothelial e plaquetas-leucócitos em mesenterial Veias Ratos

Published: August 13, 2015
doi:

Summary

This simplified application of intravital microscopy of mesentery veins in mice can be used in different models of inflammation to observe leukocyte-endothelial and platelet-leukocyte interactions.

Abstract

Microscopia intravital é um método que pode ser usado para investigar processos diferentes em regiões diferentes e vasos em animais vivos. Neste protocolo, descrevemos microscopia intravital das veias mesentério. Esta pode ser realizada num curto período de tempo com resultados reprodutíveis mostrando interacções leucócito-endotélio in vivo. Nós descrevemos um ambiente inflamatório após LPS desafio do endotélio. Mas neste modelo pode-se aplicar muitos tipos diferentes de condições inflamatórias, como bactérias, química ou biológica e investigar a administração de drogas e seus efeitos diretos sobre o animal vivo e seu impacto sobre o recrutamento de leucócitos. Este protocolo foi aplicado com sucesso a um número de diferentes tratamentos dos ratos e dos seus efeitos sobre a resposta inflamatória nos vasos. Descrevemos a visualização de leucócitos e plaquetas por fluorescência rotulando-os com rodamina 6G. Além disso, qualquer imagem específica pode ser PErformed usando moléculas fluorescente etiquetado alvejados.

Introduction

O objectivo deste protocolo é descrever uma técnica simplificada de microscopia intravital das veias mesentério em ratos vivos para observação direta da interação leucócito-endotélio e leucócitos-plaquetas em condições inflamatórias.

Microscopia intravital foi desenvolvido para estudar as interacções leucócito-endotélio in vivo sob condições inflamatórias 1,2, o que não é trivial, mas importante para compreender o recrutamento de leucócitos inflamatórios e função. O método que nós descrevemos nesse protocolo foi desenvolvido com base em publicações anteriormente publicados. Semelhante a visualização de incorporação de plaquetas num trombo crescente 3 e em paralelo com o que foi anteriormente publicado 4, uma veia mesentério exteriorizada é examinada por microscopia de luz transmitida. Existem vários outros modelos de microscopia intra-vital, como o músculo cremaster de ratos 5 ou fígado de rato e ratos 6.

Microscopia intravital da veia mesentério foi desenvolvido e aplicado em estudos anteriores por vários grupos. Temos usado essa técnica para observar diferenças no recrutamento de leucócitos entre camundongos selvagens e hydroxylase1 triptofano (TPH1) – / – ratos, que são deficientes de serotonina não-neuronal e compararam os resultados aos camundongos cujos serotonina de plaquetas foi farmacologicamente esgotados por longo prazo aplicação a um inibidor seletivo da recaptação da serotonina fluoxetina 7. Examinamos, também, interações leucócito-endotélio após o tratamento com fluoxetina aguda 8.

Neste protocolo nos concentramos em microscopia intravital das veias mesentério, porque este modelo pode ser realizada rapidamente, e permite medições válidas de interação leucócito-endotélio e plaquetas-leucócitos. Isto é muito mais difícil e em microscopia intravital de outros órgãos, tais como o osso, fígado, pele, músculo cremaster ou demorada. O modo del descrito aqui é ideal para a avaliação reprodutível de interacção célula-célula inflamatória após challengeing-o com um estímulo inflamatório, tal como a injecção intraperitoneal de lipopolissacarídeos.

Protocol

Todos os experimentos com animais foram realizados em conformidade com a lei de proteção animal Alemão (TierSchG). Os ratos foram alojados e tratados de acordo com as boas práticas animal, definidos no FELASA (www.felasa.eu/guidelines.php) eo corpo bem-estar animal nacional GV-SOLAS (www.gv-solas.de/index.html). O animal comitê de bem-estar, da Universidade de Freiburg, bem como as autoridades locais (Regierungspräsidium Freiburg) aprovou todas as experiências com animais. 1. Handling A…

Representative Results

Uma visão geral da configuração experimental descrito neste protocolo é demonstrado na Figura 1. Ela mostra um rato com um íleo-ciclo exteriorizado e seus navios, o que pode ser observado em microscopia intravital. A Figura 2 mostra certo grau de activação em animais não tratados devido a o procedimento em si. Mas não há quase nenhum rolamento lenta ou adesão firme dos leucócitos em comparação com os ratinhos tratados com LPS. A Figura 2 também mostra os …

Discussion

Aqui, descrevemos a preparação e realização de microscopia intravital das veias mesentério de ratos in vivo. Este método nos dá a oportunidade de observar as interações leucócito-endotélio e plaquetas-endotélio 11 diretamente no organismo vivo.

Como uma resposta rápida a inflamação do endotélio é ativado e interage com leucócitos e plaquetas, resultando em rolamento, adesão e transmigração 12. Mas também os leucócitos interagem com plaque…

Offenlegungen

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

This work was supported by the Deutsche Forschungsgemeinschaft (DU 1190/3-1).

Materials

Rhodamine 6G Sigma-Aldrich  989-38-8
Lipopolysaccharides from Escherichia coli 055:B5 Sigma-Aldrich L2637 

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Herr, N., Mauler, M., Bode, C., Duerschmied, D. Intravital Microscopy of Leukocyte-endothelial and Platelet-leukocyte Interactions in Mesenterial Veins in Mice. J. Vis. Exp. (102), e53077, doi:10.3791/53077 (2015).

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