Summary

Acquisizione di alta qualità video digitale di<em> Drosophila</em> Comportamenti larvali e adulti da una prospettiva laterale

Published: October 04, 2014
doi:

Summary

Qui si descrive una tecnica di microscopia semplice e ampiamente accessibili per acquisire video digitale di alta qualità di Drosophila adulti e fenotipi mutanti larvali da una prospettiva laterale.

Abstract

Drosophila melanogaster è un potente sistema modello sperimentale per studiare la funzione del sistema nervoso. Mutazioni genetiche che causano la disfunzione del sistema nervoso spesso producono larve e gli adulti che hanno locomozione fenotipi difettosi che sono difficili da descrivere adeguatamente con il testo o completamente rappresentare con una sola immagine fotografica praticabile. Modalità attuali di pubblicazioni scientifiche, tuttavia, sostengono la presentazione di supporti video digitali come materiale supplementare per accompagnare un manoscritto. Qui si descrive una tecnica di microscopia semplice e ampiamente accessibili per l'acquisizione video digitale di alta qualità di entrambi i fenotipi larve e adulti di Drosophila da una prospettiva laterale. Video di locomozione larvale e adulto da una vista laterale è vantaggioso perché permette l'osservazione e l'analisi delle sottili distinzioni e le variazioni nei comportamenti aberranti locomotiva. Abbiamo utilizzato con successo la tecnica di visualizzare e quantificare aberrant strisciare comportamenti terzo instar larve, oltre a fenotipi mutanti adulti e comportamenti, tra cui governare.

Introduction

Il frutto comune mosca Drosophila melanogaster è un potente sistema modello sperimentale per lo studio della funzione del sistema nervoso 1-3. Conservazione evolutiva di struttura e funzione del sistema nervoso con gli esseri umani, così come la facilità di manipolazione genetica e di una vasta gamma di strumenti genetici rende Drosophila l'organismo prima di modellare le malattie neurodegenerative umane 4. Mutazioni genetiche che causano la disfunzione del sistema nervoso causano spesso vitale larve mutanti e adulti Drosophila con locomozione compromessa. Fenotipi osservati nel sistema nervoso mutanti difettosi includono il ridotto tasso di locomozione, coordinamento aberrante, e movimenti spastici negli adulti, così come deficit in contrazione peristaltica della muscolatura della parete del corpo, e la paralisi parziale delle larve. Questi fenotipi sono state sfruttate nello sviluppo di high-throughput schermi genetici e test di locomozione di larve mutanti 5, 6 e 7-10 adulto Drosophila volta a quantificare la perdita di valore locomozione e l'identificazione dei geni necessari per il funzionamento del sistema nervoso. Mentre questi approcci sono estremamente utili per quantificare i comportamenti locomotive larvali e adulti, non riescono a trasmettere informazioni qualitative su ogni comportamento problema specifico. Ad esempio, mentre il mutante terzo instar larve può presentare parametri di locomozione alterati in un test comportamentale, può essere chiaro se questo è il risultato di alterazioni contrazioni peristaltiche ritmiche durante il ciclo di scansione, generale mancanza di coordinamento, o paralisi parziale del corpo posteriore muscolatura della parete. Qui si descrive una tecnica di microscopia semplice e ampiamente accessibili per l'acquisizione video digitale di alta qualità di Drosophila adulti e fenotipi locomotiva larvali da una prospettiva laterale. Il video digitale acquisito da una prospettiva laterale, permette l'osservazione diretta e l'analisi delle distinzioni sottili LocomotivE i comportamenti di un più informativo orientamento side-view.

Protocol

1 Il sistema Microscopio Stereo Nota: Anche se questo protocollo è facilmente adattabile a qualsiasi impianto stereo microscopio accoppiato ad una fotocamera digitale con la possibilità di acquisire video, dettagli sono riportati sul sistema utilizzato nel nostro laboratorio (Tabella dei materiali / attrezzature). Acquisire video digitale utilizzando uno stereo microscopio trinoculare accoppiato ad una fotocamera digitale commerciale. Per accoppiare la fotocamera digit…

Representative Results

Abbiamo utilizzato con successo questa tecnica per acquisire e quantificare il fenotipo larvale comportamentale associata alla perdita di funzione del gene Stathmin (Figura 2) 14. Il gene codifica per una proteina Stathmin normativo microtubuli che le partizioni dimeri di tubulina da pool di tubulina solubile, e si lega i microtubuli e promuove il loro smontaggio 15,16. Funzione Stathmin è necessario per mantenere l'integrità dei microtubuli nelle assoni dei…

Discussion

Forza Drosophila melanogaster s 'come sistema modello per lo studio della funzione del sistema nervoso deriva in gran parte dalla convergenza dei potenti strumenti genetici disponibili e la vasta gamma di test comportamentali robusti sviluppato. Qui vi presentiamo una tecnica di microscopia semplice e ampiamente accessibili per l'acquisizione video digitale di alta qualità di Drosophila adulti e fenotipi locomotiva larvali da una prospettiva laterale. Abbiamo utilizzato con successo questo app…

Offenlegungen

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Gli autori desiderano ringraziare Alexandra Opie per l'assistenza e il supporto tecnico, James Barton per la fornitura di video narrazione, e Ramona Flatz e Joellen Sweeney per apparire nel video allegato. Questo lavoro è stato supportato dal Charitable Trust MJ Murdock (Grant No. 2.012.205 a JED).

Materials

Trinocular Stereozoom Microscope Olympus Corporation SZ6145TR ½ C-mount was removed and replaced with 1x C-mount
1X C-mount Leeds Precision Instruments LSZ-1XCMT2
Digital Camera Coupler (43mm thread) Qioptiq Imaging Solutions 25-70-10-02
58mm to 48mm Step Down Ring B&H Video GBSDR5848
48mm to 43mm Step Down Ring B&H Video GBSDR4843
Lensmate Adapter Kit for Canon G10 LensMateOnline.com
Canon PowerShot G10 Digital Camera Canon U.S.A., Inc.
1.5ml Spectroscopic PolystereneCuvette Denville Scientific U8650-4

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Diesen Artikel zitieren
Zenger, B., Wetzel, S., Duncan, J. Acquisition of High-Quality Digital Video of Drosophila Larval and Adult Behaviors from a Lateral Perspective. J. Vis. Exp. (92), e51981, doi:10.3791/51981 (2014).

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