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Immunologie und Infektion

연쇄상 구균 폐렴으로 비강 내 식민지 화 중 염증 반응의 특성화

Published: January 17, 2014
doi:
10.3791/50490
, , ,
1Department of Pathology and Molecule Medicine,McMaster University

Summary

연쇄상 구균 폐렴을 이용한 뮤린 비소하린의 식민지화및 신봉또는 모집된 세포의 후속 추출이 설명된다. 이 기술은 나아레를 통해 유체의 비소하린과 수집을 플러시하는 것을 포함하며, 시투에서mRNA 발현의 차동 세포 정량화 및 분석을 포함한 다양한 판독에 적응할 수 있다.

Abstract

연쇄상 구균 폐렴에 의한 비인두 식민지는 폐 또는 혈류량1에침입하는 전제 조건이다. 이 유기체는 비소하린의 점막 표면을 식민지화 할 수 있으며, 여기서 호스트 방어를 극복하고 호스트의 다른 조직에 침입할 수 있습니다. 일반적으로 낮은 호흡기에 감염의 설립은 폐렴귀착됩니다. 대안적으로, 박테리아는 높은 사망률2와연관되는 박테혈증을 일으키는 혈류로 전파할 수 있고, 또는 그렇지 않으면 폐렴구균 수막염의 발달로 직접 이끌어 낼 수 있다. 비인두 식민지의 운동 및 면역 반응을 이해하는 것은 S. 폐렴 감염 모델의 중요한 측면입니다.

비강 내 식민지화의 마우스 모델은 인간모델3로부터 적응하고 비소하린4-7의 숙주 병원체 반응 연구에서 여러 연구군에 의해 사용되어 왔다. 모델의 첫 번째 부분에서, 우리는 인간 성인의 운송 이벤트와 유사한 자기 제한 세균 성 식민지를 확립하기 위해 S. 폐렴의 임상 분리를 사용합니다. 본명 상세절차는 세균성 접종의 준비를 포함하고, 그 다음에는 행정의 비강 내 경로를 통해 접종의 전달을 통해 식민지화 사건의 수립을 포함한다. 상주 대식세포는 정상 상태 동안 비소하린의 주요 세포 유형이다. 전형적으로, 감염되지 않은 마우스에 존재하는 몇몇 림프구가8,그러나 점막 식민지는 면역 반응 및 호스트 면역 세포의 후속 모집귀착될 낮은- 고급 염증 (세균성 종 및 긴장의 독성에 따라 다름)으로 이끌어 낼 것입니다. 이러한 세포는 나레를 통해 기관 내용물의 용암에 의해 격리될 수 있으며, 감염의 운동학을 더 잘 이해하기 위해 식민지 박테리아의 밀도와 상관관계가 있다.

Protocol

시작하기 전에: 모든 단계는 달리 명시되지 않는 한 생물 적 위험 수준 2 (BSL2) 생물 안전 캐비닛 (BSC)에서 수행됩니다. 실험 개시 전에 기관 지침에 따라 전염성 세균 병원균의 사용에 대한 적절한 생체 위험 승인을 획득했습니다. 또한 사전에 준비된 절차를 수행하는 데 필요한 모든 재료와 시약이 있는지 확인하십시오. 이 실험에 사용된 마우스는 잭슨 연구소, 찰스 강 또는 타코닉에?…

Representative Results

그림 1은 프로토콜의 주요 단계를 요약한 개요 회로도를 나타냅니다. 도 2-3은 본 원에 기재된 프로토콜에 내재된 미생물 방법론의 시각화를 제공한다. 도 4는 내비강폐를 수행하기 위해 마우스의 적절한 위치를 나타내고, 도 5는 S. 폐렴 균주 P1547로 식민지화된 마우스의 무게의 전형적 변화를 묘사한다. 도 6-7은 이러한 두 기술?…

Discussion

이 연구에서는 연쇄상 구균 폐렴의 임상 분리 균주와 박테리아에 대한 응답으로 nasopharynx에 모집 된 면역 세포의 후속 격리 및 특성화를 사용하여 마우스의 비강 내 식민지화를위한 자세한 방법을 제시했습니다. 우리는 어떻게 세균성 접종이 영양이 풍부한 매체에서 배양되고 처음에 비소하린으로 제한되는 마우스에 있는 식민지 사건을 설치하는 데 사용될 수 있는지 보여주었습니다. 그?…

Offenlegungen

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

저자는 연쇄상 구균 폐렴의임상 긴장의 그의 선물에 대한 펜실베니아 대학의 박사 제프리 와이저에게 감사드립니다. 이 연구는 건강 연구를 위한 캐나다 학회에 의해 투자되었습니다. 이력서는 M. G. DeGroote 펠로우십과 캐나다 흉부 학회의 펠로우십에 의해 지원되었습니다. 이 작품은 온타리오 폐 협회와 건강 연구의 캐나다 연구소 (CIHR)에 의해 투자되었다. 보우디시 실험실에서 일하는 것은 감염증 연구를 위한 마이클 G. DeGroote 센터 및 맥매스터 면역학 연구 센터에 의해 부분적으로 지원됩니다.

Materials

Name of Reagent/Material Company Catalog Number
Anti-Mouse Ly6C FITC BD Pharmingen 553104
Anti-Mouse Ly6G PE BD Pharmingen
Anti-Mouse CD45.1 eFluor 450 eBioscience 48-0453-82
Anti-Mouse F4/80 Antigen APC eBioscience 17-4801-82
Anti-Mouse CD11c PerCP-Cy5.5 eBioscience 45-0114-82
Anti-Mouse CD11b PE-Cy7 eBioscience 25-0112-82
Anti-Mouse CD3 Alexa Fluor 700 eBioscience 56-0032-82
Anti-Mouse CD4 eFluor 605NC eBioscience 93-0041-42
Intramedic Polyethylene Tubing – PE20 Becton Dickinson 427406
BD 1ml Syringe Becton Dickinson 309659
BD 26G3/8 Intradermal Bevel Becton Dickinson 305110
Buffer RLT Lysis Buffer Qiagen 79216
Difco Tryptic Soy Agar Becton Dickinson 236950
Defibrinated Sheep Blood PML Microbiologicals A0404
RNAqueous-Micro Kit Ambion AM1931
M-MuLV Reverse Transcriptase New England Biolabs M0253L
GoTaq qPCR Master Mix Promega A6001
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Puchta, A., Verschoor, C. P., Thurn, T., Bowdish, D. M. E. Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae. J. Vis. Exp. (83), e50490, doi:10.3791/50490 (2014).
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