文化における分化したヒト神経前駆細胞からの神経細胞のレーザーキャプチャーマイクロダイセクション

生涯神経新生は、側脳室の脳室下帯にと大人の哺乳類の脳¹の歯状回の顆粒下の層に発生することが知られている。神経前駆細胞（NPCの）は、これらの地域から発信は、ニューロン、アストロサイトおよびオリゴデンドロサイト²に分化することができる多能性細胞である。 NPCがあるため、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、脳卒中およびアルツハイマー病^（AD）3を含む種々の神経変性障害を有する患者に移植されるべき潜在能力の関心を生成した。 NPCを用いた研究は、一般的に、この移植角度に焦点を当てているが、神経変性の機構を決定するための細胞培養モデルとしてNPC由来のニューロンの電位が十分に利用されていない。以前の研究は、一般的にそうでないように、各実験のために単離する必要が齧歯類の脳組織から単離した有糸分裂後ニューロンを使用している自己再生。 SH-SY5Y、およびSK-N-MC細胞を含むヒト神経芽腫細胞株を拡大することができるが、それらは一次ニューロンの特性を持っていない。彼らは複数の継代のために拡張することができ、一次ニューロン^4,5の特性を有する細胞集団を生成するために分化させることができるので、人間のNPCは、一方、両方の利点を提供する。現在の研究では、ヒト胎児脳から単離されたNPCから商業的に入手可能な一貫性のあるニューロンの豊富な集団を得るための新たな分化プロトコールを記載する。これらの培養は、グリア細胞の小さな割合を含んでいないため、我々は、分子特性のために神経細胞の純粋な集団を単離するための追加のメソッドを必要としています。レーザーキャプチャーマイクロダイセクション（LCM）は、組織切片からの細胞の均質な集団を選択的遺伝子発現解析のために⁶捕捉することのできる新規な技術である。脳は、ニューロン、グリアおよび他の細胞TYからなる異質な組織であるPES。 LCMは、ニューロン特異的遺伝子発現を決定するために使用されている^7-10を解析する。我々は以前に具体的に海馬ニューロン¹¹において減少サイクリックAMP応答エレメント結合タンパク質の発現（CREB）およびBDNFを示すためにAD（のTg2576）マウス脳切片から海馬ニューロンのLCMを行った。本研究では、PEN膜スライド上で培養した神経細胞を単離するための、人間のNPCの拡大、神経分化、神経細胞のマーカーの免疫蛍光染色およびLCMのための手順について説明します。