Microdissection laser de neurones à partir de cellules différenciées Neuroprogenitor humaines en culture

Long de la vie neurogénèse est connu pour se produire dans la zone sous-ventriculaire des ventricules latéraux et dans la couche sous-granulaire du gyrus denté de l'adulte cerveau des mammifères ^1. cellules Neuroprogenitor (PNJ) qui proviennent de ces régions sont des cellules multipotentes qui peuvent se différencier en neurones, astrocytes et oligodendrocytes ^2. PNJ ont suscité un intérêt en raison de leur potentiel à être transplantés chez des patients atteints de divers troubles neurodégénératifs, y compris la maladie de Parkinson, la sclérose latérale amyotrophique, accidents vasculaires cérébraux et la maladie (AD) ³ d'Alzheimer. Des études avec des PNJ ont généralement porté sur cet angle de la transplantation mais le potentiel de neurones NPC dérivés comme un modèle de culture cellulaire afin de déterminer le mécanisme de neurodégénérescence n'a pas été pleinement exploité. Des études antérieures ont généralement utilisé des neurones post-mitotiques, isolé à partir de tissus de cerveau de rongeur qui doivent être isolés pour chaque expérience comme ils ne sont pasauto-renouvellement. Bien que des lignées de cellules de neuroblastome humain SH-SY5Y, y compris les cellules et SK-N-MC peuvent être étendus, ils n'ont pas les caractéristiques des neurones primaires. PNJ humains, d'autre part, offrent des avantages car ils peuvent être développées pour de multiples passages et peuvent être différenciées pour générer une population de cellules avec des caractéristiques de neurones primaires ^4,5. Dans la présente étude, nous décrivons un nouveau protocole de différenciation pour obtenir une population de neurones riches en uniforme de PNJ disponibles dans le commerce isolées de cerveau fœtal humain. Parce que ces cultures ne contiennent un petit pour cent des cellules gliales, nous avons besoin d'autres méthodes pour isoler une population pure de neurones pour la caractérisation moléculaire. microdissection par capture laser (LCM) est une nouvelle technique par laquelle une population homogène de cellules provenant d'une section de tissu peut être capturé de manière sélective pour l'analyse de l'expression du gène ^6. Le cerveau est un tissu hétérogène constitué par les neurones, des cellules gliales et des cellules d'autres types. LCM a été utilisée pour déterminer l'expression génique spécifique des neurones analyses ^7-10. Nous avons déjà effectué LCM de neurones de l'hippocampe de AD (Tg2576) des coupes de cerveau de souris pour montrer diminution de l'expression de la protéine de liaison cyclique élément de réponse AMP (CREB) et BDNF spécifiquement dans les neurones hippocampiques ^11. Dans la présente étude, nous décrivons les procédures pour l'expansion des PNJ humains, la différenciation neuronale, immunofluorescence pour marqueurs neuronaux et LCM pour l'isolement des neurones cultivés sur des lames de membrane PEN.