Summary

Synthese von Phase-shift Nanoemulsionen mit enger Größenverteilung für Acoustic Droplet Vaporisation und Bubble-enhanced Ultraschall-vermittelte Ablation

Published: September 13, 2012
doi:

Summary

Phase-shift Nanoemulsionen (PSNE) kann verdampft mit hoher Intensität fokussierter Ultraschall, um lokale Erwärmung und zur Verbesserung thermischen Ablation von Tumoren sein. In diesem Bericht wird die Herstellung von stabilen PSNE mit einer engen Größenverteilung beschrieben. Darüber hinaus wird der Einfluss des verdampften PSNE auf Ultraschall-vermittelte Ablation im Gewebe-ähnlichen Phantomen demonstriert.

Abstract

High-Intensity Focused Ultrasound (HIFU) wird klinisch zur thermischen Ablation von Tumoren eingesetzt. Um örtliche Erwärmung und zur Verbesserung thermischen Ablation in Tumoren haben lipidbeschichteten Perfluorkohlenstoff Tröpfchen entwickelt worden, die durch HIFU verdampft werden. Das Gefäßsystem in vielen Tumoren außergewöhnlich leaky durch ihr rasches Wachstum und Nanopartikeln Lage sind, die Fensteranordnungen eindringen und passiv in Tumoren anreichern. Somit kann die Steuerung der Größe der Tröpfchen in bessere Anreicherung in Tumoren führen. In diesem Bericht wird die Herstellung von stabilen Tröpfchen in einer Phase-Shift-Nanoemulsion (PSNE) mit einer engen Größenverteilung beschrieben. PSNE wurden im Ultraschallbad eine Lipidlösung in Gegenwart des flüssigen Perfluorkohlenstoff synthetisiert. Eine enge Größenverteilung wurde durch Extrudieren der PSNE mehrfach die Verwendung von Filtern mit einer Porengröße von 100 bzw. 200 nm erhalten. Die Größenverteilung wurde über einen 7-Tages-Frist mittels dynamischer Lichtstreuung gemessen. Polyacrylamide Hydrogele mit PSNE wurden in vitro Experimente vorbereitet. PSNE Tröpfchen in der Hydrogele wurden mit Ultraschall und die resultierenden Blasen verbessert lokalisierte Erwärmung verdampft. Verdampften PSNE ermöglicht schnelleres Aufheizen und verringert auch die Ultraschallintensität zur thermischen Ablation benötigt. So wird PSNE erwartet thermischen Ablation von Tumoren zu verbessern, potentiell verbessert therapeutischen Ergebnisse der HIFU-vermittelte thermischen Ablation Behandlungen.

Protocol

Ein. Vorbereitung der Phase-Shift-Nanoemulsion (PSNE) Lösen Sie 11 mg DPPC und 1,68 mg DSPE-PEG2000 in Chloroform Verdunstet das organische Lösungsmittel, um eine trockene Lipidfilm in einem Glas-Rundkolben bilden Auszutrocknen den Lipidfilm Nacht Rehydrieren des Lipidfilms mit 5,5 ml phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) Wärme-Lösung in einem 45 ° C Wasserbad, bis Lipidfilm auflöst, Vortexen periodisch Übertragen Lipid-Lösung in 7 ml Flasche …

Discussion

High-Intensity Focused Ultrasound (HIFU) ist klinisch zur thermischen Ablation von Tumoren eingesetzt. 1 Um lokale Erwärmung und zur Verbesserung thermischen Ablation in Tumoren haben lipidbeschichteten Perfluorcarbon Tröpfchen entwickelt worden, die durch die HIFU verdampft werden. Das Gefäßsystem in vielen Tumoren außergewöhnlich leaky durch ihr rasches Wachstum. 2 somit in der Lage, die Nanopartikel Fenestrationen eindringen und passiv in Tumoren anreichernden, ein Vorgang, der erhöhte Pe…

Offenlegungen

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Diese Arbeit wurde von einer BU / CIMIT Applied Healthcare Engineering-Promotionsstipendium, ein National Science Foundation eine stärkere Beteiligung Forschung Initiation Grant in Engineering (BRIGE) und den National Institutes of Health (R21EB0094930) unterstützt.

Materials

Common Name Manufacturer Cat. Number Full Name / Description
DPPC Avanti Lipids, Alabaster, AL, USA 850355P 1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine
DSPE-PEG2000 Avanti Lipids, Alabaster, AL, USA 880120P 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[methoxy(polyethylene glycol)-2000] (ammonium salt)
DDFP Fluoromed, Round Rock, TX, USA CAS: 138495-42-8 Dodecafluoropentane (C5F12)
PBS Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA P2194 Phosphate-buffered saline
Chloroform Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA 372978 Chloroform
Acrylamide Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA A9926 40% 19:1 acrylamide/bis-acrylamide
Tris buffer Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA T2694 1M, pH 8, trizma hydrochloride and trizma base
BSA Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA A3059 Bovine serum albumin
APS Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA A3678 Ammonium persulfate solution
TEMED Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA 87689 N,N,N’,N’-Tetramethylethylenediamine
      Equipment
Sonicator (3 mm tip) Sonics & Materials, Inc., Newtown, CT, USA Vibra-Cell
Water bath Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA Neslab EX-7
Extruder Northern Lipids, Burnaby, BC, Canada LIPEX
Extruder Filters Whatman, Piscataway, NJ, USA Nuclepore #110605 and #110606
Extruder Drain Disc Sterlitech Corporation, Kent, WA, USA #PETEDD25100
Plastic chamber U.S. Plastic Corporation, Lima, OH, USA #55288, 1 3/16″x1 3/16″x2 7/16″

Referenzen

  1. Hynynen, K., Darkazanli, A., Unger, E., Schenck, J. F. MRI-guided noninvasive ultrasound surgery. Med. Phys. 20, 107-115 (1993).
  2. Baban, D. F., Seymour, L. W. Control of tumour vascular permeability. Adv. Drug Deliv. Rev. 34, 109-119 (1998).
  3. Maeda, H., Wu, J., Sawa, T., Matsumura, Y., Hori, K. Tumor vascular permeability and the EPR effect in macromolecular therapeutics: a review. J. Control. Release. 65, 271-284 (2000).
  4. Schadlich, A. Tumor accumulation of NIR fluorescent PEG-PLA nanoparticles: impact of particle size and human xenograft tumor model. ACS Nano. 5, 8710-8720 (2011).
  5. Williams, R. Convertible perfluorocarbon droplets for cancer detection and therapy. 2010 IEEE Ultrasonics Symposium. , (2010).
  6. Martz, T. D., Sheeran, P. S., Bardin, D., Lee, A. P., Dayton, P. A. Precision manufacture of phase-change perfluorocarbon droplets using microfluidics. Ultrasound Med. Biol. 37, 1952-1957 (2011).
  7. Giesecke, T., Hynynen, K. Ultrasound-mediated cavitation thresholds of liquid perfluorocarbon droplets in vitro. Ultrasound Med. Biol. 29, 1359-1365 (2003).
  8. Sheeran, P. S., Luois, S., Dayton, P. A., Matsunaga, T. O. Formulation and Acoustic Studies of a New Phase-Shift Agent for Diagnostic and Therapeutic Ultrasound. Langmuir. 27, 10412-10420 (2011).
  9. Sheeran, P. S. Decafluorobutane as a phase-change contrast agent for low-energy extravascular ultrasonic imaging. Ultrasound Med. Biol. 37, 1518-1530 (2011).
  10. Zhang, P. . The Application of Phase-Shift Nanoemulsion in High Intensity Focused Ultrasound: An In Vitro Study [Doctoral Dissertation]. , (2011).
  11. Allen, T. M., Hansen, C., Martin, F., Redemann, C., Yau-Young, A. Liposomes containing synthetic lipid derivatives of poly(ethylene glycol) show prolonged circulation half-lives in vivo. Biochim. Biophys. Acta. 1066, 29-36 (1991).
  12. Klibanov, A. L., Maruyama, K., Beckerleg, A. M., Torchilin, V. P., Huang, L. Activity of amphipathic poly(ethylene glycol) 5000 to prolong the circulation time of liposomes depends on the liposome size and is unfavorable for immunoliposome binding to target. Biochim. Biophys. Acta. 1062, 142-148 (1991).
  13. Klibanov, A. L., Maryama, K., Torchilin, V. P., Huang, L. Amphipathic polyethyleneglycols effectively prolong the circulation time of liposomes. FEBS Lett. 268, 235-237 (1990).
  14. Gabizon, A. Prolonged circulation time and enhanced accumulation in malignant exudates of Doxorubicin encapsulated in polyethylene-glycol coated liposomes. Cancer Res. 54, 987-992 (1994).
  15. Awasthi, V. D., Garcia, D., Goins, B. A., Philips, W. T. Circulation and biodistribution profiles of long-circulating PEG-liposomes of various sizes in rabbits. Int. J. Pharm. 253, 121-132 (2003).
  16. Zhang, P., Porter, T. An in vitro study of a phase-shift nanoemulsion: a potential nucleation agent for bubble-enhanced HIFU tumor ablation. Ultrasound Med. Biol. 36, 1856-1866 (2010).
  17. Lafon, C. Gel phantom for use in high-intensity focused ultrasound dosimetry. Ultrasound Med. Biol. 31, 1383-1389 (2005).

Play Video

Diesen Artikel zitieren
Kopechek, J. A., Zhang, P., Burgess, M. T., Porter, T. M. Synthesis of Phase-shift Nanoemulsions with Narrow Size Distributions for Acoustic Droplet Vaporization and Bubble-enhanced Ultrasound-mediated Ablation. J. Vis. Exp. (67), e4308, doi:10.3791/4308 (2012).

View Video