器官型培养的全厚成年猪视网膜
Summary
在这里，我们描述了一个成本效益的技术，七天为成年猪视网膜器官文化。简单地说，无菌滤纸用于解除神经视网膜视网膜色素上皮和地方感光一面向上插入一个定制的立场提出。
Abstract
是公认的体外模型的需求，可以取代或减少动物实验。猪视网膜有一个类似于人类视网膜的神经元结构，因此，为研究人类的视网膜损伤及退行性疾病的机制的珍贵物种。在这里，我们描述了从屠宰场取得的眼睛分离成年猪视网膜器官文化的成本效益的技术。取出后眼前段，环钻刀片是用来创建多个神经视网膜布鲁赫的成年猪眼后段膜的RPE -脉络膜巩膜植。一块无菌滤纸是用来解除每个外植体视网膜神经。滤纸视网膜复杂的培养（感光面朝上）之上插入一个定制的立场，这是从培养皿的底部。使培养基中的良好循环，视网膜双方的立场。总体而言，这个过程很简单，重现性好，并允许保存至少7天的本地视网膜结构，使其成为一个有用的模型的各种哺乳动物视网膜的形态，药理，生化研究。
Protocol
1。一个细胞培养插入定制的立场 5毫升枪头（ISC BioExpress，＃P – 3250 – 19）的基础内径13毫米，这完全匹配的底部尺寸（12.6毫米，外径）10毫米（内径）NUNC细胞文化插入（聚碳酸酯膜，热，8微米，＃137443）。要的立场，吸液管被切断基地附近产生一个长6毫米的空心圆柱。然后，件从气缸侧面，采用火焰加热的刀片下创建一个环（2毫米高度），这引起了插入的高度约5毫米的…
Discussion
视觉研究人员已经建立了各种视网膜文化系统，包括器官系统，研究各种问题，如视网膜干细胞移植，视网膜再生 2，外源基因表达 3-5 。然而，成年哺乳动物视网膜是难以维持在体外 ，主要是由于高能源需求的光感受器6。小泉纯一郎等人描述了兔子的视网膜器官文化系统中，光感受器的氧气供应，提高文化插入的高度和搅拌培养基减轻。他们成功地维持长?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是由美国国立卫生研究院授予安永012031（ET），FM柯比基金会（ET），研究奖，以防止失明，公司（MAZ），新泽西州狮子会眼研究基金会（MAZ）的支持，新泽西州（MAZ），约瑟夫J和玛格丽特DiSepio视网膜病变的研究基金（MAZ），贾尼斯米切尔瓦萨和Ashby米切尔奖学金（AMK）的眼科研究所。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| MEM | Invitrogen-Gibco | 10370-021 | |
| 5 mL pipette tip | ISC BioExpress | P-3250-19 | |
| NUNC cell culture insert | Thermal | 137443 | 8μm, Polycarbonate |
| Whatman 4M Filter paper | Whatman | 1004 | |
| DMEM | Cellgro-mediatech Inc | 10-013-CV | |
| Agar | Fluka | 05040 | |
| Fungizone Amphotericin B | Invitrogen-Gibco | 15290018 | |
| Trephine blades | Bausch and Lomb | T3096 | 6.00mm |
| O.C.T. Compound | Electron Microscopy Sciences | 62550-01 | 4583 |
| Sciences | |||
| Cryostat | Leica | CM1900 | |
| Vibratome | Leica | Series 1000 | |
| Confocal microscopy; | Carl Zeiss | LSM510 | |
| Anti-Synaptic Vesicle Protein 2 (SV2) mouse monoclonal antibody | DSHB | N/A | |
| Anti-Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP) polyclonal rabbit antibody | DAKO | DAKO | |
| Propidium Iodide (PI) | Sigma | P4170 |
Referenzen
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Wang, J., Kolomeyer, A. M., Zarbin, M. A., Townes-Anderson, E. Organotypic Culture of Full-thickness Adult Porcine Retina. J. Vis. Exp. (49), e2655, doi:10.3791/2655 (2011).