Покадровый Живая съемка клонально Связанные нейронные клетки-предшественники в развивающихся данио рерио переднего мозга
Summary
Настоящий видео демонстрирует метод, который использует сочетание электропорации и конфокальной микроскопии выступать с концертами изображений на отдельных нейронных клеток-предшественников в развивающихся данио переднего мозга.<em> В естественных условиях</em> Анализ развития переднего мозга нейронных клеток-предшественников в клональных уровень может быть достигнут на этом пути.
Abstract
Точные модели разделения, миграции и дифференциации нервных клеток предшественников имеют решающее значение для правильного развития и функционирования мозга 1,2. Чтобы понять поведение нейронных клеток-предшественников в комплексе в среду естественных условиях, замедленная съемка живых нейронных клеток-предшественников в интактном мозге является критически необходимо. В этом видео мы используем уникальные особенности данио эмбрионов для визуализации развитие переднего мозга нейронных клеток-предшественников в естественных условиях. Мы используем электропорации с генетически и редко этикетке отдельных нервных клеток-предшественников. Короче говоря, ДНК-конструкции кодирования для люминесцентных маркеров вводили в желудочек переднего мозга от 22 часов после оплодотворения (HPF) данио эмбрионов и электрические импульсы были доставлены сразу. Шесть часов спустя, электропорации эмбрионов данио были установлены с низкой температурой плавления агарозы в блюдах со стеклянным дном культуры. Флуоресцентно меченых предшественников нервных клеток были тогда отображаемого для 36hours с фиксированными интервалами по конфокальной микроскопии с использованием воды погружением объектива. Настоящий метод дает возможность получить представление в естественных условиях развитие переднего мозга нейронных клеток-предшественников и может быть применен к другим частям центральной нервной системы эмбриона полосатого данио.
Protocol
Discussion
В этом видео мы продемонстрируем метод покадровой жить визуализации нейронных клеток-предшественников в клональных уровне в развивающихся данио переднего мозга. Мы проверили и изменение существующих протоколов электропорации 4-6 до генетически и флуоресцентно этикетке отдель?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Это работа была поддержана theNIH grantNS042626. Мы благодарим Курт Торн и UCSF Nikon Imaging центр за помощью изображений.
Referenzen
- Temple, S. The development of neural stem cells. Nature. 414, 112-117 (2001).
- G#246;tz, M., Huttner, W. B. The cell biology of neurogenesis. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 6, 777-788 (2005).
- Cerda, G. A., Thomas, J. E., Allende, M. L., Karlstrom, R. O., Palma, V. Electroporation of DNA, RNA, and morpholinos into zebrafish embryos. Methods. 39, 207-211 (2006).
- Hendricks, M., Jesuthasan, S. Electroporation-based methods for in vivo, whole mount and primary culture analysis of zebrafish brain development. Neural. Dev. 2, 6-6 (2007).
- Tawk, M., Bianco, I. H., Clarke, J. D. Focal electroporation in zebrafish embryos and larvae. Methods Mol. Biol. 546, 145-151 (2009).
- Tawk, M., Tuil, D., Torrente, Y., Vriz, S., Paulin, D. High-efficiency gene transfer into adult fish: a new tool to study fin regeneration. Genesis. 32, 27-31 (2002).
