8ウェルチャンバースライドを用いたin vitro のバイオフィルム形成における

（1） 体外バイオフィルム形成における 細菌のコロニーは、（一晩、適切な寒天上に成長されている）、メディアに懸濁し、OD 490は 0.65に調整したその結果細菌懸濁液は、その後1時06（1 mLの細菌懸濁液+ 5 mLを予め温めておいた培地）に希釈し、℃で約3時間、5％CO 2で中期対数増殖期に到達するために37℃でインキュベートした。 8ウェルチャンバースライドの各ウェルに予め温めておいたメディアと場所希釈液200μLと中期対数増殖サスペンション1:2500に希釈する。 37℃5％CO 2をインキュベートする。 約16時間後に、それぞれの室の隅から吸引培地および200μLの新鮮、予め温めておいた培地に追加 – バイオフィルムを破壊する可能性がありますチャンバー内部のせん断力を作成しないようにチャンバーの壁に沿ってディスペンスを。 長い24時間以上インキュベートした場合、培地ごとに12時間を変更するか、または細菌の生存性を維持するために必要。 2。バイオフィルムの可視化上記のように、各チャンバーから培地を吸引し、滅菌生理食塩水で二回軽く常駐バイオフィルムを洗浄する。 各ウェルにBacLight LIVE / DEAD染色（3μL成分の生理食塩水mL当たり+ 3μL成分B）200μLを加え、15分間室温でインキュベートする。この時点以降からの光からの文化を守る。 汚れを吸引し、以前と同様に滅菌生理食塩水で軽く2回洗浄する。 各ウェルに緩衝ホルマリン中性の200μlを加え、試料を固定するために室温で30分間インキュベートする。 固定液削除し、適切に制度的なガイドラインに準拠して処分する。 生理食塩水で2回洗浄し、上記のようにホルマリンが含まれる洗浄流体を処分。 スライドからプラスチック製の井戸を削除、カバースリップがガスケットに配置されている場合、に気泡が存在しないこともそのそれぞれに十分な生理食塩水に追加します。 封入剤とカバーガラスのカバースリップとシールの縁。マニキュアは、しかし、スライドが永久にできなくなるスライドを密封するために使用することができます。 シーラントは、顕微鏡を介して調べる前に約1時間乾燥することができます。 3。結果 図1 8ウェルチャンバースライドで形成されたバイオフィルムの代表的な3D合成画像。細菌は、緑と死菌が赤色蛍光を発する蛍光を発するデッド/ライブ染色ここで生菌で標識した。塔と水路で異なるアーキテクチャを示す全体のバイオフィルムの（A）合成画像。 （B）（）内と同じバイオフィルム、今の断面に見られる。