Multiespectrales en tiempo real imágenes de fluorescencia para la detección intraoperatoria del ganglio centinela en Oncología Ginecológica

1. Intraoperatoria cámara multiespectral de fluorescencia Un sistema de cámara de medida se ha desarrollado en el desarrollado en el Instituto de Medicina Biológica y de imagen (IBMI, de la Universidad Técnica / Helmholtz Zentrum, Munich, Alemania), en estrecha en colaboración con SurgOptix (SurgOptix Inc., Redwood Shores, California, EE.UU.). La configuración del sistema de cámara multiespectral intraoperatoria de fluorescencia se muestra en la Figura 2. La luz pasa a través de un sistema de óptica y se divide en luz visible, luz en la banda de longitudes de onda de emisión (fluorescencia) y la luz en la banda de longitudes de onda de excitación. Estos paquetes son detectados por cámaras CCD (CCD) (Figura 2). Multi-espectral de señales de todas las cámaras son procesados ​​con el fin de corregir los artefactos y el rendimiento real cuantitativa fluorocromo bio-distribución. Color y las señales de fluorescencia se puede visualizar como imágenes separadas en monitores externos o superpuestas en una sola imagen. Los filtros de excitación y emisión de la cámara se establecen en el documento de medición para recoger a 750 nm y 800 nm ± 20 respectivamente. 2. Óptica de contraste de la preparación del agente El agente de contraste fluorescente verde de indocianina (ICG, Pulsion AG, Munich, Alemania) se prepara en condiciones estériles. Una concentración de 0,5 mg / ml se utiliza. Es importante el uso de agua destilada estéril y no cloruro de sodio (NaCl), ya que ésta hará que el ICG para agregar. Después de la preparación, la solución debe ser almacenado en un lugar oscuro y fresco para evitar el deterioro rápido de la intensidad de la fluorescencia por el blanqueo. Nota: a partir de ahora mantener el ICG protegido de la luz. 3. Las imágenes intraoperatorias – Configuración e inyección de ICG La cámara se coloca y se inició en la sala de operaciones antes de la cirugía para minimizar la interferencia con el procedimiento quirúrgico estándar, y conectados a las pantallas de alta definición (Figura 2B). La cámara está cubierto en la norma paños estériles (Carl Zeiss Vision BV, Sliedrecht, Países Bajos, REF OPMI Coloque 306.071) por el investigador en estéril o la ropa. Nota: se tiene cuidado de utilizar sólo los agentes de desinfección claro, como color de los agentes desinfectantes son a menudo autofluorescentes y podría interferir con el procedimiento de imagen. Por otra parte, paños estériles y los marcadores quirúrgica puede ser autofluorescentes. Se recomienda probar todos los materiales utilizados en el campo de la O y la operación de autofluorescencia antes de la cirugía. El agente de contraste fluorescente verde de indocianina (ICG) se prepara en condiciones estériles. Una concentración de 0,5 mg / ml se utiliza. Es importante el uso de agua destilada estéril y no NaCl, ya que ésta hará que el ICG para agregar. Después de la preparación, la solución debe ser almacenado en un lugar oscuro y fresco para evitar el deterioro rápido de la intensidad de la fluorescencia. Nota: es recomendable cambiar los guantes después de la preparación de ICG, ya que incluso una pequeña cantidad de derrame de ICG puede influir en la calidad de la imagen. El procedimiento de imágenes comienza después de abrir el abdomen. Cuando el área de interés está expuesta, la cámara se maneja en el campo de operación. El zoom y el enfoque se ajusta en condiciones estériles. Luces en la sala de operaciones se apagan para una mejor detección de la señal de fluorescencia. 1,0 ml de 0,5 mg / ml de ICG se mezcla con 1,0 ml de la norma de colorante azul (azul patente / azul patente, Guerbet, Francia) en una jeringa. El cirujano inyecta el medio de contraste en los cuatro cuadrantes alrededor del tumor primario, la prevención de derrames del agente. Nota: en caso de derrame de ICG en los guantes quirúrgicos, es necesario cambiar los guantes. Las imágenes fijas o videos en tiempo real se obtienen del flujo de la linfa y la aparición de los ganglios linfáticos centinela fluorescente (Figura 3). Todas las imágenes y los vídeos se guardan directamente en el ordenador. Aparte de la fluorescencia, la SLN se detecta también de acuerdo con el protocolo estándar, ya sea utilizando una sonda de rayos gamma o por inspección visual de la coloración azul, o ambas cosas. El trazador radioactivo se administra generalmente un día antes de la cirugía, después de que un lymphoscintigram se realiza para la detección de un ganglio centinela radiactivos. Esto es parte del procedimiento estándar y no tiene lugar en el protocolo de imágenes de fluorescencia. En tiempo real de la escisión del ganglio centinela se guía tanto por la decoloración de fluorescencia y el azul de los ganglios linfáticos. La función en tiempo real de la cámara ayuda a detectar la fluorescencia de cualquier residuo o localizaciones inesperadas de los nodos de fluorescentes. Después de la extirpación del ganglio centinela, ex vivo las imágenes se adquieren de todos los ganglios linfáticos extirpados de la presencia de una señal fluorescente. El tiempo de exposición puede ser prolongada para una mayor resolución en la captura de imágenes fijas (Figura 4). El examen histopatológico de los ganglios linfáticos revela la presencia o ausencia de células tumorales en el ganglio linfático centinela. 4. RResultados epresentante Ganglios linfáticos fluorescentes se pueden detectar con una elevada relación señal-a-fondo de relación. Además, el flujo de ICG a través de los vasos linfáticos pueden ser monitoreados en tiempo real que permite la cartografía de los ganglios linfáticos. Los resultados pueden ser influenciados por aumentar la profundidad del nodo, que posiblemente requieran procedimientos diferentes de iluminación para lograr la detección. La aplicación futura de tumor objetivo específico agentes fluorescentes pueden proporcionar una detección intraoperatoria de un ganglio centinela positivo con células de cáncer con esta tecnología. Figura 1. El ganglio centinela (GC) la teoría. SLN es el primer ganglio de drenaje linfático (s) del tumor. Figura 2. Esquema de imagen del sistema de cámara de fluorescencia multiespectral (A). La configuración básica del sistema de cámaras en el quirófano (B). Figura 3. Imágenes multiespectrales de fluorescencia de un ganglio linfático en el cáncer de vulva. La imagen a color de un ganglio linfático en vivo (A). Imágenes de fluorescencia de los ganglios linfáticos mismo, en vivo (B). Pseudocolor de imágenes de fluorescencia superpuesta a la imagen en color (C). Figura 4. Imágenes multiespectrales de fluorescencia de un ex vivo linfáticos ganglios en el cáncer de cuello de útero. La imagen a color de un ganglio linfático ex vivo (A). Imágenes de fluorescencia de los ganglios linfáticos mismo, ex vivo (B). Pseudocolor de imágenes de fluorescencia superpuesta a la imagen en color (C).