Decellularisere mammary fett pads: Deriving Extracellular Matrix Hydrogels fra Mammary Fat Pads
Published: April 30, 2023
Abstract
Kilde: Alves et. al., Studere normale vevsstrålingseffekter ved hjelp av ekstracellulær matrise Hydrogels. J. Vis. Exp. (2019).
Denne videoen beskriver en teknikk for å utlede ekstracellulære matrisehydrgeler ved å decellularisere murine mammary fettputer etter ex vivo bestråling for in vitro studier. Denne hydrogelen bidrar til å etterligne in vivo brystvevsmiljøet etter strålingsbehandling for å studere tumorcelleadferd.
Protocol
1. Decellularisering MERK: Denne prosedyren ble tilpasset fra tidligere publiserte metoder fokusert på fettdecellularisering, som inkluderte natriumdeoksycholat ionisk vaskemiddel i stedet for natriumdodecylsulfat for å fjerne DNA effektivt. På dag 1fjerner du frosne mammaryfettputer eller MFPer fra -80 °C og tiner ved romtemperatur. Når de er tint, tørk MFPer kort på en delikat oppgaveserviett. Vei MFP-ene ved hjelp av en an…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Materials
| 10% Neutral Buffered Formalin, Cube with Spigot | VWR | 16004-128 | |
| 2-methylbutane | Alfa Aesar | 19387 | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma-Aldrich | A1933-25G | |
| Dulbecco's phosphate-buffered saline | Gibco | 14040133 | |
| Fisher Healthcare Tissue-Plus O.C.T. Compound | Fisher Scientific | 23-730-571 | cryostat embedding medium |
| Kimtech Science Kimwipes | Kimberly Clark | delicate task wipes | |
| n-Propanol (Peroxide-Free/ Sequencing), Fisher BioReagents | Fisher Scientific | BP1130-500 | |
| PBS (10X), pH 7.4 | Quality Biological, Inc. | 119-069-151 | Phosphate-buffered saline |
| Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
| Peracetic acid | Sigma-Aldrich | 77240-100ML | |
| Triton x-100 | Sigma-Aldrich | X100-100ML | t-Octylphenoxypolyethoxyethanol |
| Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red | Gibco | 25200-056 | |
| Richard-Allan Scientific Signature Series Hematoxylin 7211 | Richard-Allan Scientific | 7211 | |
| Whatman qualitative filter paper, Grade 4 | Whatman | 1004-110 | grade 4 qualitative filter paper |
| Xylenes (Certified ACS), Fisher Chemical | Fisher Scientific | X5-5 |
Diesen Artikel zitieren
Decellularizing Mammary Fat Pads: Deriving Extracellular Matrix Hydrogels from Mammary Fat Pads. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20229, doi: (2023).