Dieses Video beschreibt einen Test zur Bildung von Weichagarkolonien, um die Wirkung eines PADI-Enzyminhibitors und BB-Cl-Amidins auf Brustkrebs-Tumorigenität in vitrozu testen. Dieser Test ermöglicht auch die quantitative Bewertung des Zelltransformationspotenzials im Kontext genetischer Störungen.
Protocol
1. Zubereitung von 3% 2-Hydroxyethyl-Agarose In eine saubere, trockene 100 ml Glasflasche 0,9 g 2-Hydroxyethyl-Agarose (Agarose VII) gefolgt von 30 ml destilliertem Wasser geben. Mikrowelle die Mischung für 15 Sec und sanft wirbeln. Wiederholen Sie diesen Schritt mindestens drei weitere Male, bis sich das Agarosepulver vollständig auflöst. Autoclavdie die lösungshaltige Flasche für 15 min. Lassen Sie die Agarose-Lösung vor der weiteren Anwendung auf RT abkühlen. Bewahren Sie…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Materials
Zeiss Axiopot
Carl Zeiss Microscopy
1021859251
Inverted Microscope
Olympus
CKX41
DMEM/F-12
Lonza BioWhittaker
12-719F
HyClone Donor Equine Serum
Fisher Scientific
SH30074.03
Penicillin Streptomycin
Life Technologies
15140-122
2-Hydroxyethylagarose: Type VII, low gelling temperature
Soft Agar Colony Formation Assay: A Method to Test Effects of Novel Compounds on Cancer Cell Proliferation. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20226, doi: (2023).