Generierung von primärer Mammosphären: Eine Technik zur Bestimmung der Zellpotenz
Published: April 30, 2023
Abstract
Quelle: Lombardo et. al., Mammosphere Formation Assay from Human Breast Cancer Tissues and Cell Lines. J. Vis. Exp. (2015).
Dieses Video beschreibt die Isolierung von Krebsstammzellen aus Brustkrebszelllinien. Wir kultiermitteln diese Krebsstammzellen, um primäre Mammosphären zur Beurteilung der Selbsterneuerung und zur Berechnung der kugelbildenden Effizienz zu erzeugen, was einen Vergleich über verschiedene Sädichten ermöglicht.
Protocol
1. Erzeugung von primären Mammosphären aus menschlichen Brustkrebszelllinien HINWEIS: Führen Sie die folgenden Schritte unter einer sterilen Kulturhaube aus. Bereiten Sie Mammosphere Media mit DMEM/F12 vor, ergänzt durch 2 mM L-Glutamin, 100 U/ml Penicillin, 100 U/ml Streptomycin. Bereiten Sie komplette Medien unmittelbar vor der Verwendung durch Zugabe von 20 ng/ml rekombinanten humanen epidermalen Wachstumsfaktor (EGF; Sigma), 10 ng/ml rekombinanter menschliche…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Materials
| DMEM/F12 | Lonza | CC-3151 | |
| 2 mM L-glutamine | Sigma Aldrich | G8540 | |
| 100 U/ml Penicillin & Streptomycin | Sigma Aldrich | P4083 | |
| 20 ng/ml Recombinant human epidermal growth factor (EGF) | Sigma Aldrich | E9644 | |
| 20 ng/ml Recombinant human basic fibroblast growth factor (bFGF) | R&D systems | 233-FB-025 | |
| 1x B27 supplement | Invitrogen | 17504-044 | |
| Phosphate buffered saline (PBS) | Thermo Scientific | 12399902 | |
| 0.5% trypsin/0.2% EDTA | Sigma Aldrich | 59418C | |
| Fetal calf serum | First Link UK | 02-00-850 | |
| Trypan blue | Sigma Aldrich | 93595 | |
| Low attachment 6-well plates | Corning | CLS3814 |
Diesen Artikel zitieren
Generation of Primary Mammospheres: A Technique to Determine Cell Potency. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20211, doi: (2023).