Dieses Video beschreibt die Isolierung von Krebsstammzellen aus Brustkrebszelllinien. Wir kultiermitteln diese Krebsstammzellen, um primäre Mammosphären zur Beurteilung der Selbsterneuerung und zur Berechnung der kugelbildenden Effizienz zu erzeugen, was einen Vergleich über verschiedene Sädichten ermöglicht.
Protocol
1. Erzeugung von primären Mammosphären aus menschlichen Brustkrebszelllinien HINWEIS: Führen Sie die folgenden Schritte unter einer sterilen Kulturhaube aus. Bereiten Sie Mammosphere Media mit DMEM/F12 vor, ergänzt durch 2 mM L-Glutamin, 100 U/ml Penicillin, 100 U/ml Streptomycin. Bereiten Sie komplette Medien unmittelbar vor der Verwendung durch Zugabe von 20 ng/ml rekombinanten humanen epidermalen Wachstumsfaktor (EGF; Sigma), 10 ng/ml rekombinanter menschliche…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Materials
DMEM/F12
Lonza
CC-3151
2 mM L-glutamine
Sigma Aldrich
G8540
100 U/ml Penicillin & Streptomycin
Sigma Aldrich
P4083
20 ng/ml Recombinant human epidermal growth factor (EGF)
Sigma Aldrich
E9644
20 ng/ml Recombinant human basic fibroblast growth factor (bFGF)