Drosophila Nöromüsküler Kavşak (NMJ) Nicelemesi: Sinaptik Morfoloji ve fonksiyonu değerlendirmek için bir yöntem

Published: April 30, 2023

Abstract

Kaynak: Castells-Nobau, A., vd. Drosophila Nöromüsküler Kavşak Morfolojisinin Yüksek Verim ve Çok Parametrik Nicelemesi için İki Algoritma. J. Vis. Exp. (2017).

Drosophila nöromüsküler kavşak (NMJ), sinapsların morfolojisini ve işlevini incelemek için bir model olarak kullanılır. Bu video, araştırmacıların NMJ’yi karakterize etmek için ölçtüklerine dair önemli özellikleri açıklar. Örnek protokol, nicelemeyi otomatik olarak gerçekleştirebilen bir yazılımı gösterir.

Protocol

Bu protokol Castells-Nobau ve ark., Drosophila Neuromuscular Junction Morphology, J. Vis. Exp’inYüksek verimli ve Çok parametrik Nicelemesi için İki Algoritma’dan bir alıntıdır. (2017). 1. Görüntü İşlemeden Önceki Gereksinimler Daha önce açıklandığı gibi, üçüncü instar gezgin larvalarının (L3) Drosophila açık kitap hazırlıklarını gerçekleştirin. İki işaretleyicinin birleşimini kullanarak eş-immünolab…

Representative Results

Şekil 1: Uygunsuz Makro Segmentasyon Sonuçları Örnekleri. “Drosophila NMJ Morphometrics” veya”Drosophila NMJ Bouton Morphometrics” çalıştırarak sonuç görüntüleri. Sinaptik terminalin parçaları sarı anahatta (A) yer almaz. Arka planın bazı bölümleri sinaptik terminale sarı anahat (B) ile dahil edilir. Mavi iskelet çizgisi sinaptik terminalin(C…

Materials

Immunostaining Dilution
Mouse anti-discs large 1 Developmental Studies Hybridoma Bank AFFN-DLG1-4D6 1/25 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit)
Rabbit anti-horseradish peroxidase Jackson IR 323-005-021 1/500
Rabbit anti-Synaptotagmin Gift from Hugo Bellen Jan-00
Mouse anti-Cysteine string protein Developmental Studies Hybridoma Bank DCSP-1(ab49) 1/10 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit)
Mouse anti-Bruchpilot Developmental Studies Hybridoma Bank nc82 Jan-50
Goat anti-mouse Alexa Fluor 488 Life technologies A11029 1/200
Goat anti-rabbit Alexa Fluor 568 Life technologies A11011 1/500
Zenon Alexa Fluor 568 Mouse IgG1 Labeling Kit ThermoFisher Z25006
ProLong Gold Antifade Mountant ThermoFisher P36930
Equipment
Confocal microscope or fluorescence microscope Leica SP5
Zeiss Axio imager
Computer Mac or Pc
Software
FIJI

Play Video

Diesen Artikel zitieren
Drosophila Neuromuscular Junction (NMJ) Quantification: A Method to Assess Synaptic Morphology and Function. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20107, doi: (2023).

View Video