electroolfactogram(EOG)记录翔实,易于进行,和可靠的评估水平在嗅觉上皮的嗅觉功能。此协议介绍录音设置,鼠标组织编制,数据的收集,和数据分析的基本。
动物依赖于许多关键的行为,如寻找食物来源,避免天敌,确定交配和其他社会互动conspecifics,嗅觉。 electroolfactogram(EOG)记录是一个内容翔实,易于进行,和可靠的方法检测水平在嗅觉上皮的嗅觉功能。自1956年描述的青蛙1 Ottoson眼电图,眼电图记录已经应用在许多脊椎动物,包括蝾螈,兔,大鼠,小鼠和人类(斯科特和斯科特-约翰逊,2002年,文献2审查) 。在小鼠基因改造的最新进展,重新燃起兴趣的眼电图记录嗅觉功能的生理特性,在基因敲除和基因敲除小鼠。 EOG录音已成功应用,证明核心作用的嗅觉信号转导元件 3-8,以及最近的特点一定的监管机制的贡献OSN 的反应9-12。
气味检测发生在嗅上皮表面的纤毛OSNs,信号转导级联导致离子通道的开放,产生的电流流入的纤毛和去极化膜 13 。 EOG是负电位,细胞外记录在嗅觉上皮细胞表面的嗅觉刺激后,从2在录音领域的个别反应OSNs所造成的潜在变化的总和。因此的眼电图的振幅和动力学的比较基因改造和其他实验操作的影响底层的OSN的气味反应的分子信号如何提供有价值的信息。
在这里,我们描述了一个关于编制小鼠嗅觉鼻甲空气相EOG记录。简单地说,牺牲鼠标后,嗅觉鼻甲接触,沿中线由一分为二的头部和消除隔。鼻甲准备,然后放置在录音设置,并记录电极放置在嗅觉上皮细胞的表面,内侧鼻甲之一。参比电极是电气连接的组织,通过缓冲溶液。吹的上皮细胞表面保持湿润的一个加湿空气的连续流。膨化成加湿空气流刺激上皮的气味解决方案的蒸气。反应记录,并作进一步的分析数字化。
在本议定书中所描述的设置,在嗅觉上皮细胞表面的气味刺激之间的组织筹备工作保持一致,与野生型和突变型小鼠相比,尽管确切的气味浓度和动态是未知的。几个因素,特别是录音的位置和加湿空气的流速,导致的眼电图的变化。应注意记录从相同鼻甲相近的立场,以尽量减少变化。这可以很容易地实现始终如一地记录从同一侧的头部和保持显微镜的足迹,气味输送管,空气表之间的组织样本不变micromanipulators。此外,组织样本应立即放入加湿空气流后,剥离,以防止过度干燥的组织。
对小鼠的眼电图的录音也可以进行准备鼠标上的液体灌注仪器鼻甲7,14,15,或离开头部完好,鼻甲16,17以上的钻了一个小洞,插入电极。每个眼电图记录的变化有其自身的优势:空气相记录在本议定书中所述的组织筹备工作需要设置少量的,是最容易进行的录音使用的液体灌注设备方便的药理试剂的使用,虽然许多气味的疏水性气味传递的复杂性,最后,在这头是原封不动的录音,可以使用“人工嗅”实验,虽然电极放置较充分暴露时鼻甲是很难。
The authors have nothing to disclose.
我们感谢宜君宋,博士和Hattar Kuruvilla赵三实验室生物系,美国约翰霍普金斯大学的建议和帮助的成员。由美国国立卫生研究院拨款DC007395和DC009946支持。
Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Air delivery tube | equipment | Custom fabricated | The barrel of a 1-mL syringe with a T-fitting can be used as a substitute | |
Air table | equipment | Newport | LW3030B-OPT | |
Amplifier | equipment | Warner | DP-301 | |
Computer and Data Acquisition Software | equipment | Axograph 4.9.2 on Apple Macintosh | Updated versions of Axograph for Mac OS X and Windows are available from http://axographx.com/. | |
Butane torch | equipment | A crème brûlèe torch works well | ||
Digitizer | equipment | Axon Instruments | Digidata 1322A | |
Dissecting Scope | equipment | Scienscope | SSZ | |
Electrode holder | equipment | Harvard Apparatus | 64-1021 | |
Magnetic Holding Devices (12 mm) | equipment | World Precision Instruments | M10 | |
Micromanipulators | equipment | World Precision Instruments | M3301R M3301L |
|
Micropipette Puller | equipment | Sutter Instrument Co. | P2000 | |
Oscilloscope | equipment | Tektronix | 5110 | |
Picospritzer III | equipment | Parker Instrumentation | ||
Silicone tubing | equipment | Nalge Nunc | ||
Specimen stage | equipment | Custom fabricated | Any small solid object can be used to elevate the mounting dish. Immobilize the dish with modeling clay. | |
18 gage needles | material | Becton Dickinson | 305195 | |
2 oz. glass bottles | material | VWR International | 16152-201 | |
Glass capillaries | material | World Precision Instruments | TW150F-6 | |
Silicone stoppers size 16D | material | Chemware | D1069809 | |
Silver wire | material | World Precision Instruments | AGW1010 | |
SylGuard 184 | material | Dow Corning | SYLG184 | From World Precision Instruments |
Agarose | reagent | Invitrogen | 15510-027 | |
Amyl acetate | reagent | Aldrich | W504009 | |
Calcium chloride (CaCl2) | reagent | Sigma | C-1016 | |
Dimethyl sulfoxide (DMSO) | reagent | Sigma | D5879 | |
HEPES | reagent | Fisher | BP310 | |
Heptaldehyde | reagent | Aldrich | H2120 | |
Magnesium chloride hexahydrate (MgCl2+6H2O) | reagent | Sigma | M9272 | |
Sodium chloride (NaCl) | reagent | JT Baker | 3624-05 | |
flowmeter | equipment | Gilmont | GF-2260 |