electroolfactogram (EOG) 녹음은 후각 상피의 수준에서 후각 기능을 평가의 유익 – 실시 – 쉽고 안정적인 방법입니다. 이 프로토콜은 녹음 설정, 마우스 조직 준비, 데이터 수집, 그리고 기본적인 데이터 분석을 설명합니다.
동물은 음식 소스를 찾을 수 천적을 피하고, 짝짓기 및 기타 사회적 상호 작용에 대한 conspecifics을 식별하는 많은 중요한 행동에 대한 후각에 따라 달라집니다. electroolfactogram (EOG) 녹음은 후각 상피의 수준에서 분석 후각 기능, 정보를 수행하기 쉽고, 안정 방법입니다. 개구리 1 오토슨하여 EOG의 1956 설명 이후, EOG 녹음은 도롱뇽, 토끼, 쥐, 마우스, 그리고 인간 (스캇과 스콧 – 존슨, 2002, 심판 2. 검토) 등 많은 척추 동물에 적용되었습니다. 생쥐에 유전자 조작의 최근 발전 노크 아웃의 후각 기능의 생리적 특성에 대한 EOG 녹음에 관심을 rekindled 및 마우스 기능을 노크합니다. EOG 녹음이 성공적으로 후각 신호 전달 구성 요소 3-8의 중심 역할을 설명하고, 최근에는 9-12 OSN 응답 특정 규제 메커니즘의 기여를 특성화하기 위해 적용되었습니다.
Odorant 감지가 속눈썹에 흐름과 멤브레인 13 depolarizes 전류를 발생, 신호 전달의 캐스케이드는 이온 채널 개방에 이르게 OSNs의 속눈썹에있는 후각 상피의 표면에서 발생합니다. EOG 녹음이 분야 2 개인 반응 OSNs로 인한 잠재적인 변화의 변론으로 인한, odorant의 자극에 따라 후각 상피의 표면에 extracellularly 기록 부정적인 가능성이다. EOG의 진폭과 반응 속도론의 비교함으로써 유전자 변형 및 기타 실험 조작은 냄새에 OSN 응답을 기본 분자 신호에 영향을 미치는 방법에 대한 유용한 정보를 제공합니다.
여기 마우스 후각 turbinates의 준비에 공기 위상 EOG 녹음을 설명합니다. 간단히 마우스를 희생 후 후각 turbinates은 정중선을 따라 머리를 bisecting 그리고 심장을 제거하여 노출됩니다. turbinate 준비는 다음 녹음 설정에 배치하고, 기록 전극은 중간 turbinates 중 하나에있는 후각 상피의 표면에 배치됩니다. 참조 전극은 전기 버퍼 솔루션을 통해 조직에 연결되어 있습니다. humidified 공기의 지속적인 흐름은 그것이 촉촉한 유지하는 상피의 표면을 통해 날려입니다. odorant 솔루션의 수증기는 상피를 자극하는 humidified 공기의 흐름에 부풀 수 있습니다. 응답 기록하고 자세한 분석을 위해 디지털됩니다.
이 프로토콜에서 설명하는 설정으로, 후각 상피의 표면에 odorant의 자극은 정확한 odorant 농도 및 역학 알 수없는 경우에도, 야생 유형 및 돌연변이 생쥐 간의 비교있게 조직 준비 사이의 일관성을 것입니다. 여러 가지 요인, 특히 녹음 위치와 humidified 공기의 흐름 속도는 EOG 변화의 원인이됩니다. 케어는 변화를 최소화하기 위해 동일한 turbinate에 유사한 위치에서 레코드로 이동한다. 이것은 쉽게 일관 머리 같은 측면에서 녹음 및 현미경, 냄새 전달 관 및 조직 샘플 사이의 변경되지 않은 공기 테이블에 micromanipulators의 발자국을함으로써 얻을 수 있습니다. 조직의 과도한 건조를 방지하기 위해 절개 후뿐만 아니라, 조직 샘플은 즉시 humidified 공기 흐름에 배치해야합니다.
생쥐에 EOG 녹음도 7, 14, 15, 또는 머리는 그대로두고 turbinates 16, 17 위에 뚫고 작은 구멍에 전극을 삽입하여이 turbinates 준비 마우스 액체 살포 장치와 함께 진행하실 수 있습니다. EOG 녹음의 각 변화는 자신의 강점을 갖고 있습니다 :이 프로토콜에 설명된 조직 준비에 공기 위상 녹음 설정의 최소 금액을 요구하고 수행하는 가장 쉬운되며 액체 살포 장치를 사용하여 녹음 약리 시약의 사용을 촉진,하지만 많은 odorants의 소수성 특성은 악취 배달 복잡, 마지막으로, 머리가 그대로 남아있는 기록은 '인공 도청'실험에 사용할 수 전극 배치는 turbinates가 완전히 노출하는 경우보다 힘들지만.
The authors have nothing to disclose.
우리는 박사 Yijun 노래, 그리고 생물의학과, 조언과 도움을 존스 홉킨스 대학의 Hattar Kuruvilla 조의 트라이 – 연구실 구성원 감사합니다. NIH 교부금 DC007395 DC009946 및 지원.
Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
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Air delivery tube | equipment | Custom fabricated | The barrel of a 1-mL syringe with a T-fitting can be used as a substitute | |
Air table | equipment | Newport | LW3030B-OPT | |
Amplifier | equipment | Warner | DP-301 | |
Computer and Data Acquisition Software | equipment | Axograph 4.9.2 on Apple Macintosh | Updated versions of Axograph for Mac OS X and Windows are available from http://axographx.com/. | |
Butane torch | equipment | A crème brûlèe torch works well | ||
Digitizer | equipment | Axon Instruments | Digidata 1322A | |
Dissecting Scope | equipment | Scienscope | SSZ | |
Electrode holder | equipment | Harvard Apparatus | 64-1021 | |
Magnetic Holding Devices (12 mm) | equipment | World Precision Instruments | M10 | |
Micromanipulators | equipment | World Precision Instruments | M3301R M3301L |
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Micropipette Puller | equipment | Sutter Instrument Co. | P2000 | |
Oscilloscope | equipment | Tektronix | 5110 | |
Picospritzer III | equipment | Parker Instrumentation | ||
Silicone tubing | equipment | Nalge Nunc | ||
Specimen stage | equipment | Custom fabricated | Any small solid object can be used to elevate the mounting dish. Immobilize the dish with modeling clay. | |
18 gage needles | material | Becton Dickinson | 305195 | |
2 oz. glass bottles | material | VWR International | 16152-201 | |
Glass capillaries | material | World Precision Instruments | TW150F-6 | |
Silicone stoppers size 16D | material | Chemware | D1069809 | |
Silver wire | material | World Precision Instruments | AGW1010 | |
SylGuard 184 | material | Dow Corning | SYLG184 | From World Precision Instruments |
Agarose | reagent | Invitrogen | 15510-027 | |
Amyl acetate | reagent | Aldrich | W504009 | |
Calcium chloride (CaCl2) | reagent | Sigma | C-1016 | |
Dimethyl sulfoxide (DMSO) | reagent | Sigma | D5879 | |
HEPES | reagent | Fisher | BP310 | |
Heptaldehyde | reagent | Aldrich | H2120 | |
Magnesium chloride hexahydrate (MgCl2+6H2O) | reagent | Sigma | M9272 | |
Sodium chloride (NaCl) | reagent | JT Baker | 3624-05 | |
flowmeter | equipment | Gilmont | GF-2260 |