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Medición de las tasas de recambio de proteínas en células cultivadas senescentes y no divisorias con etiquetado metabólico y espectrometría de masas
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生物化学
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Measurement of Protein Turnover Rates in Senescent and Non-Dividing Cultured Cells with Metabolic Labeling and Mass Spectrometry
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Medición de las tasas de recambio de proteínas en células cultivadas senescentes y no divisorias con etiquetado metabólico y espectrometría de masas

DOI:
10.3791/63835-v

•

08:52 min

•

April 06, 2022

•

, ,
1Laboratory of Genetics and Genomics, National Institute on Aging Intramural Research Program,National Institutes of Health, 2Translational Gerontology Branch, National Institute on Aging Intramural Research Program,National Institutes of Health

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:58Labeling of Cells Pulsed SILAC and Harvest of Lysates
  • 02:29In-Solution Trypsin Digestion and Sample Clean-Up with Solid-Phase Extraction (SPE)
  • 04:15Data-Dependent Acquisition Mass Spectrometry Analysis and Calculation of Protein Half-Lives
  • 06:31Results: Measurement of Protein Turnover Rates in Senescent and Non-Dividing Cultured Cells Using pSILAC Mass Spectrometry
  • 08:13Conclusion

Summary

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Este protocolo describe el flujo de trabajo para el etiquetado metabólico de células senescentes y no en división con SILAC pulsado, análisis de espectrometría de masas no dirigido y un cálculo simplificado de las vidas medias de las proteínas.

Tags

Protein TurnoverSenescent CellsNon-dividing CellsMetabolic LabelingMass SpectrometrySILACProtein HomeostasisCellular StressAgingNeurodegenerative DiseaseLC-MSTrypsinUreaAmmonium BicarbonateDithiothreitolIodoacetamide

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