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時間分解タンパク質誘導蛍光強化を利用して、一度に1つのαシヌクレインモノマーの安定した局所構造を同定する
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JoVE 杂志 生物化学
Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One α-Synuclein Monomer at a Time
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時間分解タンパク質誘導蛍光強化を利用して、一度に1つのαシヌクレインモノマーの安定した局所構造を同定する

DOI:
10.3791/62655-v

•

07:56 min

•

May 30, 2021

•

,
1Department of Biological Chemistry, The Alexander Silberman Institute of Life Sciences, Faculty of Mathematics & Science, The Edmond J. Safra Campus,The Hebrew University of Jerusalem, 2The Center for Nanoscience and Nanotechnology,The Hebrew University of Jerusalem

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:48Single-Molecule Protein-Induced Fluorescence Enhancement (smPIFE) Sample Preparation and Data Acquisition
  • 02:19smPIFE Burst Analysis
  • 05:07Results: Estimation of Mean Fluorescence Lifetime and Burst Recurrence Analysis
  • 07:12Conclusion

Summary

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時間分解された単一分子タンパク質誘導蛍光増強は、タンパク質の局所的な構造変化に敏感な蛍光分光性近接センサとして有用である。ここでは、より長い範囲のFRET定規を使用して測定した場合、球状に非構造化および不安定として知られているα-Synucleinの安定した局所的な立体構造を発見するために使用できることを示す。

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Keywords: Time-resolvedProtein-induced Fluorescence EnhancementSingle-moleculeAlpha-synucleinStructural SubpopulationsLocal ConformationsSulfo-Cy3BSAWater Immersion ObjectiveLaser FocusPhoton DetectionFRETBurstsPhoton-HDF5

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