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विज़ुअलाइज़ेशन और TGF के परिमाणीकरण π / BMP / SMAD विभिन्न द्रव कतरनी तनाव शर्तों के तहत निकटता-बंधन-परख का उपयोग कर सिग्नलिंग
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JoVE 杂志 生物化学
Visualization and Quantification of TGFβ/BMP/SMAD Signaling under Different Fluid Shear Stress Conditions using Proximity-Ligation-Assay
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विज़ुअलाइज़ेशन और TGF के परिमाणीकरण π / BMP / SMAD विभिन्न द्रव कतरनी तनाव शर्तों के तहत निकटता-बंधन-परख का उपयोग कर सिग्नलिंग

DOI:
10.3791/62608-v

•

11:38 min

•

September 14, 2021

•

, ,
1Institute for Chemistry and Biochemistry,Freie Universität Berlin, 2International Max-Planck Research School for Biology and Computation

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:40Cell Culture and Fluid Shear Stress Exposure
  • 02:55Fixation
  • 04:58Blocking and Incubation with Primary Antibody
  • 06:28Incubation with PLA Probe and Ligation
  • 07:34Amplification and Mounting
  • 09:14Results: Effect of Shear Stress on the SMAD Protein Interactions
  • 11:02Conclusion

Summary

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यहां, हम एक साथ कल्पना करने और कई एसएमएडी परिसरों का विश्लेषण करने के लिए एक प्रोटोकॉल स्थापित करते हैं जो एंडोथेलियल कोशिकाओं में निकटता बंधाव परख (पीएलए) का उपयोग करके पैथोलॉजिकल और शारीरिक द्रव कतरनी तनाव की स्थिति के संपर्क में हैं।

Tags

TGF-β/BMP/SMAD SignalingProximity Ligation AssayFluid Shear StressMicrofluidic Flow ChannelsHUVEC CellsTranscription Factor ComplexesVascular Biology

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