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Misurare il legame nucleotidico a proteine di membrana intatte e funzionali in tempo reale
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Measuring Nucleotide Binding to Intact, Functional Membrane Proteins in Real Time
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Misurare il legame nucleotidico a proteine di membrana intatte e funzionali in tempo reale

DOI:
10.3791/61401-v

•

08:33 min

•

March 11, 2021

•

, ,
1Department of Physiology, Anatomy and Genetics,University of Oxford, 2Department of Chemistry and Neuroscience Program,Trinity College

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:36Unroofed Membrane Experiments
  • 04:36Patch-Clamp Fluorometry Experiment
  • 05:56Results: Representative Measurement of Nucleotide Binding to Intact, Functional Membrane Proteins in Real Time
  • 07:55Conclusion

Summary

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Questo protocollo presenta un metodo per misurare il legame dei nucleotidi adenina ai recettori in tempo reale in un ambiente cellulare. Il legame è misurato come trasferimento di energia di risonanza di Förster (FRET) tra derivati del nucleotide trinitrofenile e proteine marcate con un amminoacido fluorescente non canonico.

Tags

Nucleotide BindingMembrane ProteinsFRETATPPotassium ChannelDiabetesUnroofed MembraneSonicationMicroscopyANAPFluorescence Imaging

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