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Creación de sistemas de dimerización de proteínas altamente específicos inducidos químicamente por la selección de fagos escalonados de una biblioteca combinatoria de anticuerpos de un solo dominio
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JoVE 杂志 生物化学
Creating Highly Specific Chemically Induced Protein Dimerization Systems by Stepwise Phage Selection of a Combinatorial Single-Domain Antibody Library
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Creación de sistemas de dimerización de proteínas altamente específicos inducidos químicamente por la selección de fagos escalonados de una biblioteca combinatoria de anticuerpos de un solo dominio

DOI:
10.3791/60738-v

•

10:17 min

•

January 14, 2020

•

, , , ,
1Department of Biochemistry and Institute for Protein Design,University of Washington

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:47TG1 Cell and Negative Selection Bead Preparation
  • 02:15Positive Selection Bead Preparation
  • 03:33Phage-displayed Nanobody Elution and Input/Output Titrations and Infection
  • 05:15Single Clone Isolation
  • 06:22Anchor Binder Validation
  • 08:13Results: Representative Anchor and Dimerization Binder Characterization
  • 09:39Conclusion

Summary

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La creación de sistemas de dimerización de proteínas inducidos químicamente con la afinidad y especificidad deseadas para cualquier ligando de moléculas pequeñas dado tendría muchas aplicaciones de detección y accionamiento biológico. Aquí, describimos un método eficiente y generalizable para la ingeniería de novo de sistemas de dimerización inducidos químicamente a través de la selección escalonada de una biblioteca combinatoria de anticuerpos de un solo dominio visualizada por fago.

Tags

Protein DimerizationBiosensorPhage DisplaySingle-domain AntibodySmall MoleculeCell BehaviorCell Metabolite MonitoringStreptavidin BeadsBiotinylated LigandNegative And Positive Selection

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