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2',7'-ジクロロジドロフルオレセイン・ジアセテート染色による接着性細胞中の全活性酸素種の検出
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JoVE 杂志 生物化学
Detection of Total Reactive Oxygen Species in Adherent Cells by 2′,7′-Dichlorodihydrofluorescein Diacetate Staining
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2',7'-ジクロロジドロフルオレセイン・ジアセテート染色による接着性細胞中の全活性酸素種の検出

DOI:
10.3791/60682-v

•

04:53 min

•

June 23, 2020

•

,
1Department of Biochemistry and Molecular Biology,University of New Mexico

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:32Cell Seeding and DCFH-DA Solution Preparation
  • 01:32DCFH-DA Staining
  • 02:12Image Acquisition and Intensity Measurement
  • 03:29Results: Iron Treatment Increases ROS in Colorectal Cancer Cells
  • 04:07Conclusion

Summary

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ここでは、2',7'-ジクロロジヒドロフルオレセインジアセインジアセテート(DCFH-DA)を用いて全細胞活性酸素種(ROS)を検出するプロトコルを提示する。この方法は、蛍光顕微鏡で接着細胞における細胞ROS局在を可視化し、蛍光プレートリーダーでROS強度を定量化することができる。このプロトコルは、シンプルで効率的で費用対効果が高いプロトコルです。

Tags

Reactive Oxygen SpeciesDCFH-DA StainingAdherent CellsFluorescence MicroscopyFluorescence Plate ReaderOxidative StressHCT116 Colorectal Cancer CellsFerrous SulfateDoxorubicinRIPA BufferBradford AssayFluorescence Intensity Quantification

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