需要订阅 JoVE 才能查看此. 登录或开始免费试用。
In vitro-allestedsnærværende og Deubiquitinationassays af Nukleosomale histoner
Chapters
- 00:04Title
- 01:01GSH-agarose Affinity Purification of the GST-RING1B(1-159)-BMI1 (1-109) E3 Ubiquitin Ligase Complex
- 02:16Purification of the BAP1/DEUBAD (ASXL2) Deubiquitinase Complex
- 04:58Purification of the Nucleosomes from HEK293T Cells
- 07:38Nucleosome Ubiquitination Assay Using BMI1/RING1B E3 Ubiquitin Ligase Complex and In Vitro Nucleosomal H2A DUB Assay Using BAP1/DEUBAD
- 09:05Results: Purification, Ubiquitination, and Deubiquitination
- 10:40Conclusion
Allestedsnærværende er en post-translationel modifikation, der spiller en vigtig rolle i cellulære processer og er tæt koordineret af deubiquitination. Defekter i begge reaktioner ligger til grund for humane patologier. Vi leverer protokoller til gennemførelse af allestedsnærværende og deubiquitination reaktion in vitro ved hjælp af rensede komponenter.
Tags
In Vitro UbiquitinationDeubiquitinationNucleosomal HistonesPurified ComponentsUbiquitination MechanismsDeubiquitination MechanismsEnzyme MutationsHuman DiseaseHigh-throughput ScreeningSmall Molecule InhibitorsTherapeuticsBacteria LysisPMSFAntiprotease CocktailGSH BeadsChromatography ColumnGlutathioneHis-BAP1MBP-DEUBADNickel NTA BeadsImidazole
