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Identificação de substratos de quinase CK2 novela usando uma abordagem bioquímica versátil
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JoVE 杂志 生物化学
Identification of Novel CK2 Kinase Substrates Using a Versatile Biochemical Approach

Identificação de substratos de quinase CK2 novela usando uma abordagem bioquímica versátil

DOI:
10.3791/59037-v

•

11:11 min

•

February 21, 2019

•

, ,
1Department of Biochemistry and Molecular Biology,Drexel University College of Medicine

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:35Preparation of the Tissue Samples
  • 01:20Kinase Assay: Thiophosphorylation and Alkylation
  • 02:34Preparation of the Desalting Columns
  • 03:40Removal of PNBM
  • 04:42Immunoprecipitation: Part I
  • 05:32Protein A/G Agarose Bead Preparation
  • 06:39Immunoprecipitation: Part II
  • 08:19Analysis/Validation of Results
  • 09:06Results: Analysis and Identification of Novel CK2 Kinase Substrates
  • 10:48Conclusion

Summary

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O objetivo do presente protocolo é rotular, enriquecer e identificar substratos de proteína quinase CK2 de uma amostra biológica complexa como um lisado celular ou homogeneizado de tecido. Este método utiliza aspectos únicos da biologia CK2 para essa finalidade.

Tags

CK2Kinase SubstratesBiochemical ApproachEndogenous SubstratesCell LysateGTPgammaSPNBMSephadex G-25Affinity Purification

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