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Medición de alta sensibilidad de transcripción DNA Factor obligatorio afinidades por valoración competitiva utilizando microscopía de fluorescencia
JoVE 杂志
生物化学
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JoVE 杂志 生物化学
High Sensitivity Measurement of Transcription Factor-DNA Binding Affinities by Competitive Titration Using Fluorescence Microscopy
DOI:

06:38 min

February 07, 2019

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Chapters

  • 00:04Title
  • 01:00Oligomer Annealing
  • 01:45Gel Preparation
  • 03:35Addition of the Competitor DNA Solution and Image Acquisition
  • 04:41Competitive Titration Assay and the Fitting Procedure
  • 05:17Results: Determining TF-DNA Binding Affinities Using Fluorescence Microscopy
  • 06:07Conclusion

Summary

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Aquí presentamos un nuevo método para la determinación de las afinidades de Unión en equilibrio y en la solución con alta sensibilidad a gran escala. Esto mejora el análisis cuantitativo de enlace de la DNA factor de transcripción. El método se basa en las medidas de anisotropía de fluorescencia automatizada en un sistema de control.

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