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Análisis complejos de la proteína dinámica montan en y de interferometría de biocapa Biosensor usando espectrometría de masas y microscopia electrónica
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生物化学
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JoVE 杂志 生物化学
Analyzing Dynamic Protein Complexes Assembled On and Released From Biolayer Interferometry Biosensor Using Mass Spectrometry and Electron Microscopy
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Análisis complejos de la proteína dinámica montan en y de interferometría de biocapa Biosensor usando espectrometría de masas y microscopia electrónica

DOI:
10.3791/57902-v

•

09:30 min

•

August 06, 2018

•

, , , , ,
1Department of Biochemistry and Molecular Biology,University of Kansas Medical Center, 2Department of Chemistry,Massachusetts Institute of Technology

Chapters

  • 00:04Title
  • 01:28Assembly of Prepore Anthrax Toxin Complex on a PDEA-modified Amine Reactive Biosensor Surface
  • 04:37Assembly of Pore Anthrax Toxin Complex on PDEA-modified Amine Reactive Biosensor Surface
  • 05:26Identification of Released Macromolecular Assemblies from BLI Biosensors by Negative Stain Electron Microscopy and Mass Spectrometry
  • 06:50Results: Analysis of Dynamic Protein Complexes by Biolayer Interferometry, Electron Microscopy, and Mass Spectrometry
  • 08:29Conclusion

Summary

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Aquí presentamos un protocolo para supervisar el montaje y desmontaje de la toxina del ántrax mediante interferometría de la biocapa (BLI). Tras el montaje y desmontaje en la superficie del biosensor, los complejos de proteínas grandes son liberados de la superficie para la visualización e identificación de componentes de los complejos usando microscopia electrónica y espectrometría de masas, respectivamente.

Tags

Protein ComplexesBiolayer InterferometryMass SpectrometryElectron MicroscopyAnthrax ToxinBiosensorProtein AssemblyPH-induced Structural RearrangementsLFnNHSEDCPDEAL-cysteine

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