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Une mesure Quantitative des espèces réactives de l’oxygène et phénotype sécrétoire associée à la sénescence dans des fibroblastes humains normaux pendant la sénescence induite par l’oncogène
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JoVE 杂志 发育生物学
A Quantitative Measurement of Reactive Oxygen Species and Senescence-associated Secretory Phenotype in Normal Human Fibroblasts During Oncogene-induced Senescence
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Une mesure Quantitative des espèces réactives de l’oxygène et phénotype sécrétoire associée à la sénescence dans des fibroblastes humains normaux pendant la sénescence induite par l’oncogène

DOI:
10.3791/57890-v

•

13:59 min

•

August 12, 2018

•

, ,
1Department of Biochemistry, College of Medicine,Dong-A University, 2Peripheral Neuropathy Research Center, College of Medicine,Dong-A University

Chapters

  • 00:00Title
  • 01:10Inducing Oncogene-induced Senescence
  • 03:11Monitoring Senescence by Senescence Associated ß-galactosidase (SA ß-gal) Staining
  • 04:27Quantifying ROS Induction during OIS
  • 06:42Quantifying IL-6 and IL-8 mRNA Expression for SASP Anaylsis using Real-time PCR
  • 08:53Quantifying the Levels of Secreted IL-6 and IL-8 Proteins for SASP Analysis using ELISA
  • 10:56Results: Representative ROS and SASP Expression Analysis during H-Ras-induced Senescence
  • 12:25Conclusion

Summary

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ROS intracellulaire a été démontré à jouer un rôle important dans l’induction de la sénescence cellulaire. Nous décrivons ici une analyse sensible pour quantifier les niveaux ROS au cours de la sénescence cellulaire. Nous fournissons également des protocoles d’évaluation le phénotype sécrétoire associée à la sénescence, qui aurait été contribue à diverses dysfonctions liées à l’âge.

Tags

ROSReactive Oxygen SpeciesSenescence-associated Secretory PhenotypeSASPH-RasOncogene-induced SenescenceWI-38 FibroblastsIntracellular ROSIL-6IL-8BOSC CellsRetroviral DNAPolybrenePuromycinSA Beta-gal Staining

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