Growing Protein Crystals with Distinct Dimensions Using Automated Crystallization Coupled with <em>In Situ</em> Dynamic Light Scattering

Daniela Baitan; Robin Schubert; Arne Meyer; Karsten Dierks; Markus Perbandt; Christian Betzel

doi:10.3791/57070

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Cristalli della proteina crescente con dimensioni distinte utilizzando automatizzato cristallizzazione accoppiato con In Situ dispersione della luce dinamica

JoVE 杂志
生物化学

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Growing Protein Crystals with Distinct Dimensions Using Automated Crystallization Coupled with In Situ Dynamic Light Scattering

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Cristalli della proteina crescente con dimensioni distinte utilizzando automatizzato cristallizzazione accoppiato con In Situ dispersione della luce dinamica

DOI:

10.3791/57070-v

•

09:15 min

•

August 14, 2018

•

Daniela Baitan², Robin Schubert³, Arne Meyer, Karsten Dierks, Markus Perbandt³, Christian Betzel³

¹Xtal Concepts GmbH, ²Institute for Biochemistry and Molecular Biology, Laboratory for Structural Biology of Infection and Inflammation c/o DESY,University of Hamburg, ³The Hamburg Center for Ultrafast Imaging,University of Hamburg

Chapters

00:04Title
00:56Parameters, Solution Setup, and Micro-dosage Systems Adjustment
02:42Seeing a Thaumatin Drop in the Experimental Chamber and in Situ Measurements
04:48Sample Evaporation, Precipitant Addition, and Tracking the Evolution of the Crystallization Droplet Over Time
06:12Recovery of Crystallization Droplet
07:09Results: Formation of Protein Microcrystals from T. daniellii Thaumatin
07:57Conclusion

Summary

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Qui presentiamo un protocollo per la produzione controllata di microcristalli di proteina. Il processo utilizza un dispositivo automatico che permette la manipolazione controllata di diversi parametri di cristallizzazione. La cristallizzazione della proteina avviene mediante aggiunta automatizzata e controllata di soluzioni di cristallizzazione durante il monitoraggio e indagare la distribuzione di raggio delle particelle nella gocciolina di cristallizzazione.

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Microcristallografia dei cristalli proteici e<em> In Cellulo</em> Diffrazione

Cromatografia a scambio ionico (IEX) accoppiata alla diffusione della luce multi-angolo (MALS) per la caratterizzazione e la separazione delle proteine

Caratterizzazione delle proteine mediante cromatografia di dimensioni-esclusione accoppiata alla dispersione luminosa multi-angolo (SEC-MALS)

Purificazione dell'affinità MS2 accoppiata con sequenziamento dell'RNA nei batteri gram-positivi

Derivazione di cristalli proteici con I3C utilizzando lo screening casuale della matrice microseed

Ottimizzazione della crescita dei cristalli di endotiapepsina per esperimenti di cristallografia seriale

Saggio di pulldown accoppiato con co-espressione in cellule batteriche come strumento efficiente in termini di tempo per testare interazioni proteina-proteina impegnative