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Primer-Free Seleção Aptamer usando uma biblioteca de DNA Aleatório
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生物学
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JoVE 杂志 生物学
Primer-Free Aptamer Selection Using A Random DNA Library

Primer-Free Seleção Aptamer usando uma biblioteca de DNA Aleatório

DOI:
10.3791/2039-v

•

11:14 min

•

July 26, 2010

•

, , , , ,
1Department of Pathology, Hershey Medical Center,Pennsylvania State University, 2Department of Chemistry,Pennsylvania State University, 3Departments of Pathology, and Biochemistry and Molecular Biology, Hershey Medical Center,Pennsylvania State University, 4Materials Research Institute,Pennsylvania State University

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:12Introduction
  • 01:39Preparation of PF Library-DNA Fragments
  • 03:26Preparation of S100B-bound Beads
  • 04:55Selection & Recovery of Aptamers
  • 06:40TOPO Cloning and Sequencing
  • 07:17Sandwich Binding Assays
  • 09:11Representative Results
  • 10:35Conclusion

Summary

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Protocolos SELEX compreendem várias rodadas de seleção, cada um dos que exigem a regeneração de ligantes vinculado, que por sua vez requerem seqüências de primers que flanqueiam as regiões fixo biblioteca aleatória. Essas seqüências de primers fixo pode interferir com o processo de seleção (falsos positivos e negativos). Aqui apresentamos um primer sem protocolo.

Tags

Primer-Free Aptamer SelectionRandom DNA LibraryAptamersOligonucleotidesDNARNAAffinitiesAntibodiesIn Vitro Selection ProcessSystematic Evolution Of Ligands By EXponential Enrichment (SELEX)TargetsSmall MoleculesProteinsMacromoleculesIn Vivo Diagnostic ApplicationsTherapeutic ApplicationsSpecificitySynthesizedProcessing ConditionsImmunogenicitySizeNucleotides (nt)Nucleic Acid LibrariesRandomized RegionsPrimer SitesSelection Process ComplicationsBioinformatics Approaches

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