This content is Free Access.
Chapters
- 00:00Title
- 01:38Introduction
- 02:30Experimental Design
- 03:58Immobilization of the Ligand Papain for CFCA Analysis
- 07:34Determining Cystatin B Concentration Using the CFCA Assay
- 11:07Measuring the Kinetics of Cystatin B binding to Papain
- 17:13CFCA assay and Kinetics of Cystatin B binding to Papain Representative Results
- 18:47Conclusion
Wir wenden label-free-Protein-Interaktion Analyse mittels Biacore X100 für Struktur-Funktions-Analyse der Bindung von mehreren Cystatin B-Mutanten durch kinetische Charakterisierung Papain. Calibration-free-Konzentration Analyse (EUFA) misst die Konzentration des Proteins mit behielt bindende Aktivität, ohne die Notwendigkeit für eine Standard-Kurve. Wir zeigen, dass die Bestätigung der Konzentrationen mit EUFA erhöht die Zuverlässigkeit der kinetischen Analyse und die kinetischen Konstanten zuverlässig bestimmt, auch wenn die Aktivität eines rekombinanten Proteins reduziert wird.
Tags
Protein ConcentrationKineticsAffinity DeterminationStructure-function AnalysisCysteine Protease InhibitorCystatin BPapainReal-time Label-free AnalysisBiacore X100Point MutationsInteractionCalibration-free Concentration Analysis (CFCA)A280Single-cycle Kinetics (SCK)Association Rate Constant (ka)Affinity (KD)Reliable ResultsInteraction Mechanism
