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L'importance de la concentration de protéines correct pour Cinétique et Détermination d'affinité en analyse structure-fonction
JoVE 杂志
生物学
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JoVE 杂志 生物学
The Importance of Correct Protein Concentration for Kinetics and Affinity Determination in Structure-function Analysis
DOI:

19:16 min

March 17, 2010

Chapters

  • 00:00Title
  • 01:38Introduction
  • 02:30Experimental Design
  • 03:58Immobilization of the Ligand Papain for CFCA Analysis
  • 07:34Determining Cystatin B Concentration Using the CFCA Assay
  • 11:07Measuring the Kinetics of Cystatin B binding to Papain
  • 17:13CFCA assay and Kinetics of Cystatin B binding to Papain Representative Results
  • 18:47Conclusion

Summary

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On applique l'étiquette sans analyse de l'interaction des protéines avec X100 Biacore structure-fonction de l'analyse de la liaison de plusieurs mutants cystatine B à travers la papaïne caractérisation cinétique. Étalonnage sans analyse de concentration (ACCP) mesure la concentration de protéine avec une activité de liaison maintenu sans la nécessité d'une courbe d'étalonnage. Nous montrons que la confirmation de concentrations en utilisant CFCA augmente la fiabilité de l'analyse cinétique et que les constantes cinétiques peut être déterminée de manière fiable même si l'activité d'une protéine recombinante est réduite.

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