Summary

Зеленый синтез, характеризация, инкапсуляция и измерение потенциала высвобождения новых микро-/субмикронных частиц щелочного лигнина

Published: March 01, 2024
doi:

Summary

Описаны новые, простые методики синтеза и характеристики биосовместимых микро- и субмикронных частиц лигнина. Эти составы обеспечивают простой подход к использованию гетерополимера, а также альтернативу для рационального проектирования многофункциональных матриц носителей с потенциальной применимостью в биомедицине, фармацевтической технологии и пищевой промышленности.

Abstract

Применение биополимерных микро-/нанотехнологий в человеческой, ветеринарной, фармацевтической и пищевой технике быстро растет в связи с большим потенциалом частиц на основе биополимеров в качестве эффективных систем-носителей. Использование лигнина в качестве основной гетерополимерной биоматрицы для разработки инновационных микро-/субмикронных составов позволяет достичь повышенной биосовместимости и предлагает различные активные функциональные группы, представляющие возможности для индивидуализации физико-химических свойств и биологической активности составов для различных применений. Целью настоящего исследования явилась разработка простой и экологичной методики синтеза частиц лигнина микро- и субмикронного размера; оценить их физико-химические, спектральные и структурные характеристики; и изучить их способность к инкапсуляции биологически активных молекул и потенциал высвобождения биофлавоноидов in vitro в смоделированных желудочно-кишечных средах. В представленных методиках применяются дешевые и экологически чистые растворители; Простые, простые, быстрые и чувствительные процессы, требующие небольшого количества оборудования, нетоксичных веществ и простых методов для их характеристики, определения инкапсуляционной способности к плохо растворимым в воде биологически активных соединений морина и кверцетина, а также потенциала высвобождения лигниновых матриц in vitro .

Introduction

В настоящее время склонность к биополимерам, таким как целлюлоза, хитозан, коллаген, декстран, желатин и лигнин, в качестве прекурсоров для разработки микро- и субмикронных носителей с настраиваемым размером, физико-химическими свойствами и биофункциональностью, возросла в биомедицинской, фармацевтической и пищевой промышленности из-за их применимости в тканевой инженерии, 3D-биопечати, in vitro платформы моделирования заболеваний, упаковочная промышленность, приготовление эмульсий и доставка питательных веществ, среди прочего 1,2,3.

Новые исследования подчеркивают аспекты гидрогелей на основе лигнина, а также микро- и наносоставов4 как предпочтительных носителей, используемых для упаковочных материалов для пищевых продуктов5, накопителей энергии6, косметики7, термостабилизаторов/светостабилизаторов, армированных материалов и матриц носителей лекарств8 для доставки гидрофобных молекул, улучшения УФ-барьеров9, в качестве армирующих агентов в нанокомпозитах, а также в качестве альтернативы неорганическим наночастицам в связи с некоторыми недавними проблемами безопасности 10,11,12. Причиной этой тенденции является биосовместимость, биоразлагаемость и нетоксичность природного гетеробиополимера, а также его доказанная биологическая активность лигнин-антиоксидантного потенциала и поглощения радикалов, антипролиферативная и антимикробная активность 13,14,15,16,17.

В научной литературе описываются различные методы синтеза (самосборка, осаждение против растворителей, кислотное осаждение и сдвиг растворителя)18 и характеристика микро-/наноразмерных составов на основе лигнина, включая применение дорогостоящих или вредных растворителей, таких как тетрагидрофуран (ТГФ), диметилсульфоксид (ДМСО), N,N-диметилформамид (ДМФА) и ацетон, а также сложные, непрямые и утомительные процессы, в которых используется много оборудования и токсичных веществ.,19,20.

Для преодоления последних недостатков в следующих протоколах представлены новые методики синтеза микро- и субмикронных частиц на основе лигнина с использованием дешевых и экологически чистых растворителей; простые, простые, быстрые и чувствительные процессы, требующие небольшого количества оборудования, нетоксичных веществ и простых методов для их характеризации и определения инкапсуляционной способности к плохо растворимым в воде биологически активным соединениям и потенциала высвобождения лигниновых матриц in vitro . Представленные лабораторные методы производства выгодны для производства функциональных носителей лигнина с перестраиваемыми размерами, высокой инкапсулирующей способностью и устойчивым поведением высвобождения in vitro с использованием простых процедур определения характеристик и экологически чистых химических веществ, которые могут найти применение в различных областях биомедицинских наук и пищевых технологий. Два флавоноида применялись в качестве молекул-мишеней, инкапсулированных в частицы лигнина: морин — в микрочастицы, а кверцетин — в субмикронные частицы. Различие в структурах обоих флавоноидов заключается только в положении второй -OH-группы в В-ароматическом кольце: -ОН-группа находится в 2′-положении в морине и в 3′-положении в кверцетине, таким образом, оба органических соединения являются позиционными изомерами. Последний факт предполагает сходное поведение обоих биологически активных природных соединений в процессах инкапсуляции и/или высвобождения.

Protocol

1. Синтез микрочастиц лигнина Приготовьте водный раствор щелочного лигнина 50 мг/мл, растворив 2,5 г щелочного лигнина в 50 мл сверхчистой воды на магнитной мешалке. Приготовьте 1% раствор Tween 80, растворив 1 мл Tween 80 в 100 мл сверхчистой воды. Приготовьте 2 М раствор HNO3…

Representative Results

Для получения микро-/субмикронных частиц щелочного лигнина был применен метод осаждения против растворителей. Водный раствор разбавленной неорганической кислоты-азотной кислоты/органической кислоты-лимонной кислоты диспергировали в водный раствор щелочного лигнина, обогащенный эк…

Discussion

К числу основных критических вопросов современных методик синтеза для разработки лекарственных препаратов-носителей на основе биополимеров относится применение опасных органических реагентов – летучих и легковоспламеняющихся растворителей, таких как тетрагидрофуран, ацетон, мета…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Это исследование было поддержано Болгарским научным фондом по контракту No KΠ-06 H59/3 и научным проектом No 07/2023 FVM, Университет Тракия.

Materials

automatic-cell counter EVE, NanoEnTek
Citric acid Sigma 251275  ACS reagent, ≥99.5%
digital water bath Memmert
Eppendorf tubes, 1.5-2 mL
Ethanol Sigma 34852-M absolute, suitable for HPLC, ≥99.8%
Folin–Ciocalteu’s phenol reagent Sigma F9252
 freeze dryer Biobase
gallic acid Sigma- BCBW7577 monohydrate
HCl Sigma 258148 ACS reagent, 37%
HNO3 Sigma 438073  ACS reagent, 70%
lignin, alkali Sigma 370959
morin Sigma PHL82601
NaCl Sigma S9888 ACS reagent, ≥99.0%
Na2CO3 Sigma 223530 powder, ≥99.5%, ACS reagent
NaOH Sigma 655104 reagent grade, 97%, powder
orbital shaker IKA KS 130 basic
pH-meter Consort
phosphate-buffered saline (PBS) Sigma RNBH7571
Quercetin hydrate Sigma STBG3815V
statistical software for Excel Microsoft Corporation XLSTAT  Version 2022.4.5.
Tween 80 Sigma P8074 BioXtra, viscous liquid
ultracentrifuge Hermle Z 326 K
Ultrapure water system Adrona INTEGRITY+
ultrasound homogenizer Bandelin Sonopuls HD 2070
UV/Vis spectrophotometer Hach-Lange DR 5000

References

  1. Yu, X., et al. Lignin nanoparticles with high phenolic content as efficient antioxidant and sun-blocker for food and cosmetics. ACS Sustainable Chem. Eng. 11 (10), 4082-4092 (2023).
  2. Boarino, A., Klok, H. -. A. Opportunities and challenges for lignin valorization in food packaging, antimicrobial, and agricultural applications. Biomacromolecules. 24 (3), 1065-1077 (2023).
  3. Aadil, K., Barapatre, A., Jha, H. Synthesis and characterization of Acacia lignin-gelatin film for its possible application in food packaging. Bioresour. Bioprocess. 3 (27), 1-11 (2016).
  4. Sharma, S., et al. Valorization of lignin into nanoparticles and nanogel: characterization and application. Bioresour. Technol. Reports. 18, 101041 (2022).
  5. Zadeh, E. M., O’Keefe, S. F., Kim, Y. -. T. Utilization of lignin in biopolymeric packaging films. ACS Omega. 3 (7), 7388-7398 (2018).
  6. Beaucamp, A., et al. Lignin for energy applications – state of the art, life cycle, technoeconomic analysis and future trends (Critical Review). Green Chem. 24, 8193-8226 (2022).
  7. Antunes, F., et al. From sugarcane to skin: Lignin as a multifunctional ingredient for cosmetic application. Int J Biol Macromol. 234, 123592 (2023).
  8. Garg, J., et al. Applications of lignin nanoparticles for cancer drug delivery: An update. Materials Letters. 311, 131573 (2022).
  9. Anushikha, K. K. Lignin as a UV blocking, antioxidant, and antimicrobial agent for food packaging applications. Biomass Conv. Bioref. , 1-14 (2023).
  10. Freitas, F. M. C., et al. synthesis of lignin nano- and micro-particles: Physicochemical characterization, bioactive properties and cytotoxicity assessment. Int J Biol Macromol. 163, 1798-1809 (2020).
  11. Rismawati, R., Nurdin, I. A., Pradiptha, M. N., Maulidiyah, A., Mubarakati, N. J. Preparation and characterization of lignin nanoparticles from rice straw after biosynthesis using Lactobacillus bulgaricus. Journal of Physics: Conference Series. 9th International Seminar on New Paradigm and Innovation of Natural Sciences and its Application. 1524, 012070 (2020).
  12. Worku, L. A., et al. Synthesis of lignin nanoparticles from Oxytenanthera abyssinica by nanoprecipitation method followed by ultrasonication for the nanocomposite application. Journal of King Saud University – Science. 35 (7), 102793 (2023).
  13. Gala Morena, A., Tzanov, T. z. Antibacterial lignin-based nanoparticles and their use in composite materials. Nanoscale Adv. 4, 4447-4469 (2022).
  14. Ivanova, D., Nikolova, G., Karamalakova, Y., Marutsova, V., Yaneva, Z. Water-soluble alkali lignin as a natural radical scavenger and anticancer alternative. Int J Mol Sci. 24 (16), 12705 (2023).
  15. Ivanova, D., Toneva, M., Simeonov, E., Antov, G., Yaneva, Z. Newly synthesized lignin microparticles as bioinspired oral drug-delivery vehicles: Flavonoid-carrier potential and in vitro radical-scavenging activity. Pharmaceutics. 15 (4), 1067 (2023).
  16. Yaneva, Z., et al. Antimicrobial potential of conjugated lignin/morin/chitosan combinations as a function of system complexity. Antibiotics. 11, 650 (2022).
  17. Handral, H. K., Wyrobnik, T. A., Lam, A. T. -. L. Emerging trends in biodegradable microcarriers for therapeutic applications. Polymers. 15 (6), 1487 (2023).
  18. Figueiredo, P., Lintinen, K., Hirvonen, J. T., Kostiainen, M. A., Santos, H. A. Properties and chemical modifications of lignin: Towards lignin-based nanomaterials for biomedical applications. Prog. Mater. Sci. 93, 233-269 (2018).
  19. Tang, Q., et al. Lignin-based nanoparticles: a review on their preparations and applications. Polymers. 12 (11), 2471 (2020).
  20. Zhao, W., Simmons, B., Singh, S., Ragauskas, A., Cheng, G. From lignin association to nano-/micro-particle preparation: extracting higher value of lignin. Green Chemistry. 18 (21), 5693-5700 (2016).
  21. Stewart, H., Golding, M., Matia-Merino, L., Archer, R., Davies, C. Manufacture of lignin microparticles by anti-solvent precipitation: Effect of preparation temperature and presence of sodium dodecyl sulfate. Food Res Int. 66, 93-99 (2014).
  22. Beisl, S., Friedl, A., Miltner, A. Lignin from micro- to nanosize: Applications. Int. J. Mol. Sci. 18, 2367 (2017).
  23. Mishra, P. K., Ekielski, A. A simple method to synthesize lignin nanoparticles. Colloids Interfaces. 3, 52 (2019).
  24. Qian, Y., Deng, Y., Qiu, X., Li, H., Yang, D. Formation of uniform colloidal spheres from lignin, a renewable resource recovered from pulping spent liquor. Green Chem. 16, 2156-2163 (2014).
  25. Tardy, B. L., et al. Lignin nano- and microparticles as template for nanostructured materials: formation of hollow metal-phenolic capsules. Green Chem. 20, 1335-1344 (2018).
  26. Silva, M., et al. Paraquat-loaded alginate/chitosan nanoparticles: preparation, characterization and soil sorption studies. J Haz Mat. 190 (1-3), 366-374 (2011).
  27. Georgieva, N., Yaneva, Z. Comparative evaluation of natural and acid-modified layered mineral materials as rimifon-carriers using UV/VIS, FTIR, and equilibrium sorption study. Cogent Chem. 1 (1), 1-16 (2015).
  28. Zhang, P., Chen, D., Li, L., Sun, K. Charge reversal nano-systems for tumor therapy. J Nanobiotechnol. 20, 31 (2022).
  29. Yaneva, Z. L., Georgieva, N. V. Removal of diazo dye from the aqueous phase by biosorption onto ball-milled maize cob (BMMC) biomass of Zea mays. Maced. J. Chem. Chem. Eng. 32 (1), 133-149 (2013).
  30. Zatorska, M., et al. Drug-loading capacity of polylactide-based micro- and nanoparticles – Experimental and molecular modeling study. Int J Pharmaceutics. 591, 120031 (2020).
  31. Yaneva, Z., Georgieva, N., Grumezescu, A. M. Chapter 5 – Physicochemical and morphological characterization of pharmaceutical nanocarriers and mathematical modeling of drug encapsulation/release mass transfer processes. Nanoscale Fabrication, Optimization, Scale-Up and Biological Aspects of Pharmaceutical Nanotechnology. , 173-218 (2018).
  32. Yaneva, Z., Georgieva, N., Staleva, M. Development of d,l-α-tocopherol acetate/zeolite carrier system: equilibrium study. Monatshefte fur Chemie Chemical Monthly. 147 (7), 1167-1175 (2016).
  33. Yaneva, Z., Georgieva, N. Study on the physical chemistry, equilibrium, and kinetic mechanism of Azure A biosorption by Zea mays biomass. Journal of Dispersion Science and Technology. 35 (2), 193-204 (2014).

Play Video

Cite This Article
Yaneva, Z., Ivanova, D., Toneva, M. Green Synthesis, Characterization, Encapsulation, and Measurement of the Release Potential of Novel Alkali Lignin Micro-/Submicron Particles. J. Vis. Exp. (205), e66216, doi:10.3791/66216 (2024).

View Video